附件：甲氨蝶呤檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2023年第22號）.doc

甲氨蝶呤檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在為醫(yī)療器械注冊申請人（以下簡稱“申請人”）進行甲氨蝶呤檢測試劑的注冊申報提供技術(shù)指導(dǎo)，同時也為醫(yī)療器械監(jiān)督管理部門對注冊申報資料的審評提供技術(shù)參考。

本指導(dǎo)原則是對該類試劑注冊申報資料的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補充。

本指導(dǎo)原則是供申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料。需在遵循相關(guān)法規(guī)和強制性標準的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于以化學(xué)發(fā)光法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、均相酶免疫等方法對人體血清/血漿中甲氨蝶呤進行定量檢測的體外診斷試劑。其他方法學(xué)的甲氨蝶呤檢測試劑注冊可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.申請表

申請人應(yīng)按照填表要求填寫。

2.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品的命名應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》要求。產(chǎn)品名稱一般由三部分組成，第一部分：被測物名稱為甲氨蝶呤；第二部分：用途，如測定試劑或檢測試劑；第三部分：方法或者原理，如化學(xué)發(fā)光法、均相酶免疫、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫層析法等。

3.分類編碼

根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，甲氨蝶呤檢測試劑管理類別為Ⅱ類，分類編碼為6840。

4.既往溝通記錄

在產(chǎn)品申報前，如果申請人與監(jiān)管機構(gòu)針對申報產(chǎn)品以會議形式進行了溝通，或者申報產(chǎn)品與既往注冊申報相關(guān)，應(yīng)提交相關(guān)溝通記錄。

5.主文檔授權(quán)信

如適用，申請人應(yīng)當對主文檔引用的情況進行說明。申請人應(yīng)當提交由主文檔所有者或其備案代理機構(gòu)出具的授權(quán)申請人引用主文檔信息的授權(quán)信。授權(quán)信中應(yīng)當包括引用主文檔的申請人信息、產(chǎn)品名稱、已備案的主文檔編號、授權(quán)引用的主文檔頁碼/章節(jié)信息等內(nèi)容。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括技術(shù)原理、主要生產(chǎn)工藝、包裝描述、研發(fā)歷程、預(yù)期用途、預(yù)期使用環(huán)境、臨床適應(yīng)證、不良事件情況等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和《醫(yī)療器械注冊申報資料和批準證明文件格式要求（體外診斷試劑）》的相關(guān)要求。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險管理資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析，應(yīng)符合GB/T 42062《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

無法正確進行測試或結(jié)果解釋存在錯誤可能對患者造成不當管理風(fēng)險。甲氨蝶呤安全范圍窄、服藥個體化差異大、具有細胞毒性，不良反應(yīng)較多，低于有效血藥濃度無法抑制腫瘤生長，高于其有效血藥濃度則會引起胃腸道反應(yīng)、肝硬化、腎臟損害等副作用及不良反應(yīng)。因此對攝入甲氨蝶呤的患者進行血藥濃度監(jiān)測對減少不良反應(yīng)及指導(dǎo)臨床個體化安全用藥具有重要的意義。

進行風(fēng)險分析時，應(yīng)識別出產(chǎn)品的其它特定風(fēng)險，并對風(fēng)險分析方法進行描述。如果可以選擇使用其它方法來解決所識別出的特定風(fēng)險，或已識別出不同于本指南中風(fēng)險的其它風(fēng)險，應(yīng)提供詳細信息來支持所采用的、解決該風(fēng)險的方法。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應(yīng)當說明理由。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

    3.1產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和編制要求的相關(guān)規(guī)定進行編寫。同時結(jié)合產(chǎn)品具體適用的指導(dǎo)原則或相關(guān)國家標準、行業(yè)標準以及產(chǎn)品的特點，明確保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的各項性能指標和檢驗方法。

3.2主要性能指標

該產(chǎn)品作為定量檢測試劑主要包括以下性能指標：試劑的外觀、裝量(如適用)、空白限（如適用）、檢出限、正確度、線性區(qū)間、精密度、特異性等；如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，其性能指標和檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述，如：外觀、裝量（如適用）、均勻性、預(yù)期結(jié)果等。不同方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)方法學(xué)特點制訂不同的性能指標。

3.3產(chǎn)品檢驗報告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進行檢驗。有適用的國家標準品的，應(yīng)當使用國家標準品對產(chǎn)品進行檢驗?？商峤灰韵氯我恍问降臋z驗報告：

3.3.1申請人出具的自檢報告。

3.3.2委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)出具的檢驗報告。

如產(chǎn)品提交自檢報告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。

4.分析性能研究

定量檢測體外診斷試劑的分析性能一般包括正確度，精密度，包容性，空白限、檢出限及定量限，分析特異性，高劑量鉤狀效應(yīng)，測量區(qū)間及可報告區(qū)間，適用的樣本類型等。產(chǎn)品的準確度（accuracy）與正確度和精密度有關(guān)。申請人應(yīng)設(shè)計合理的試驗方案，對各項分析性能進行充分評估。

4.1一般研究建議

由于患者樣本能真實反映游離藥物和結(jié)合藥物、代謝產(chǎn)物以及其他合并服用的藥物對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，性能評估（如樣本穩(wěn)定性，線性區(qū)間，空白限、檢出限及定量限，精密度，正確度等）時應(yīng)盡可能納入預(yù)期使用人群（即攝入甲氨蝶呤的患者）的樣本進行評價。確需使用加標樣本進行研究時，應(yīng)提供關(guān)于標準品純度、代謝產(chǎn)物或潛在干擾物質(zhì)、樣品類型的信息等。添加分析物時，加入體積應(yīng)盡可能少（原則上少于總體積的10%）；添加干擾/交叉物質(zhì)時，應(yīng)盡量使用接近體內(nèi)循環(huán)形式的樣品（加入體積不超過5%）或純品。還應(yīng)確保在每項分析中都包含所有的分析步驟。

一般應(yīng)有研究方案和研究報告，清晰描述研究目的、試驗地點和方法，試驗采用的具體試劑名稱、規(guī)格和批次、儀器名稱和型號，樣本類型、來源、處理方法、基質(zhì)類型及背景信息等，體現(xiàn)結(jié)果數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析過程及結(jié)果。

分析性能評估的結(jié)果應(yīng)在產(chǎn)品說明書中進行描述，合理聲稱產(chǎn)品性能。

4.2對于本試劑，建議著重對以下性能進行研究

4.2.1樣本穩(wěn)定性

應(yīng)充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進行評價并提交研究資料。內(nèi)容包括建議的保存條件、添加劑（如抗凝劑）和運輸條件（如涉及）等。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【樣本要求】中進行詳細說明。

4.2.2適用的樣本類型

目前該產(chǎn)品臨床應(yīng)用指南推薦的樣本類型為血清或血漿樣本。

4.2.3校準品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

應(yīng)明確申報產(chǎn)品配套的校準品和質(zhì)控品。提供試劑配套校準品量值溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料（應(yīng)當提交在所有適用機型上進行賦值或驗證的資料）。同時，至少應(yīng)對校準品的正確度、質(zhì)控品的可接受區(qū)間/值（預(yù)期結(jié)果）以及校準品/質(zhì)控品的均勻性進行性能評估。如校準品/質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)研究資料。

4.2.4正確度

正確度由系統(tǒng)測量誤差決定，通常用偏倚表示。根據(jù)檢測試劑的實際情況，參考物質(zhì)、比較測量程序等的可獲得性，申請人可選擇下述方法進行正確度評價。應(yīng)提供正確度評價用物質(zhì)或比較測量程序的基本信息和選擇依據(jù)。

4.2.4.1使用參考物質(zhì)的正確度評價。

推薦的參考物質(zhì)包括：具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認的參考品、標準品，參考測量程序賦值的臨床樣本。一般情況下，建議采用2～3個水平的參考物質(zhì)，代表試劑測量區(qū)間內(nèi)的高、低濃度。進行多次重復(fù)檢測，采用檢測結(jié)果平均值與參考量值計算偏倚。

4.2.4.2回收試驗

該產(chǎn)品有國家/國際藥品標準物質(zhì)，可采用回收試驗進行正確度評價。將標準物質(zhì)或分析物純品（純度為：98%-102%）加入臨床樣本中，配制成回收樣品，進行檢測。

檢測至少三個水平的回收樣品，代表試劑測量范圍的高、中、低濃度。每個濃度重復(fù)檢測（重復(fù)測試次數(shù)不小于3），采用檢測結(jié)果平均值計算回收率。

4.2.4.3方法學(xué)比對

采用申報試劑與合理的比較測量程序同時檢測臨床樣本，通過兩者的比對研究和偏倚估計，進行申報試劑的正確度評價。比較測量程序可選擇參考測量程序或同類試劑。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報試劑的測量區(qū)間。在性能建立時，建議對每個樣本重復(fù)檢測，以平均值或中位數(shù)進行回歸分析。

4.2.5精密度

應(yīng)對精密度指標，如標準差或變異系數(shù)等的評價標準做出合理要求。應(yīng)考慮樣本類型、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗方案進行評價。設(shè)定合理的精密度評價周期，例如為期至少20天的檢測。對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，獲得實驗室內(nèi)精密度、實驗室間精密度、批間精密度等結(jié)果。建議對檢測范圍內(nèi)低、中、高至少3個濃度水平的精密度進行評估。3個濃度分別為（a）接近治療效果不佳范圍或可報告范圍下限，（b）在治療范圍內(nèi)的濃度，以及（c）接近可報告范圍上限或毒性范圍的濃度。精密度研究可能涉及多天、多地點檢測，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。  

4.2.6空白限、檢出限及定量限

定量檢測體外診斷試劑對樣本濃度下限的檢出能力指標包括空白限（LoB）、檢出限（LoD）及定量限（LoQ）。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體情況選擇適用的方法進行檢出能力的研究，如產(chǎn)品不適用于LoB、LoD和LoQ的概念，應(yīng)提供充分說明。

4.2.6.1空白限、檢出限與定量限的建立

LoB，LoD，LoQ的建立需分別選擇多個獨立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進行研究。

LoB一般由多個獨立的空白樣本（無分析物）的檢測結(jié)果計算獲得；LoD一般由多個獨立的低濃度（含有分析物）樣本的檢測結(jié)果，結(jié)合LoB進行計算獲得。應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品的原理、檢測結(jié)果差異和數(shù)據(jù)分布，選擇合理的試驗方案和統(tǒng)計分析方法。對于空白樣本檢測結(jié)果為零，可采用對多個已知分析物濃度的樣本進行系列稀釋后重復(fù)檢測獲得LoD。

LoQ應(yīng)滿足預(yù)設(shè)準確度指標，即考慮偏倚和精密度的要求。偏倚可通過檢測具有可接受參考量值的樣本進行評估，所以需獲得已知濃度的低水平樣本。如涉及將樣本稀釋至低濃度水平，應(yīng)確保稀釋液不引起明顯的基質(zhì)效應(yīng)，且在低濃度區(qū)間呈線性。精密度的評估可根據(jù)檢測試劑及其應(yīng)用確定其測量條件，一般應(yīng)至少包括重復(fù)性和日間精密度。

在某些情況下，如無法在合適的低水平分析物濃度下確定偏倚，可采用其他合理的替代方法評估LoQ，例如研究試劑精密度達到特定要求時的最低分析物濃度。建議僅在無法確定偏倚時采用替代方法，并且應(yīng)設(shè)置較為嚴格的精密度要求。

4.2.6.2空白限、檢出限與定量限的驗證

LoB，LoD，LoQ的驗證需各選擇至少2個樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進行試驗。每個試劑批次至少需要獲得20個檢測結(jié)果，計算符合要求的檢測結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則4.2.6.1建立的LoB，LoD，LoQ得到驗證。一般來講，LoB總是低于LoD，而LoD則低于或等于LoQ。

4.2.7分析特異性

應(yīng)評估分析待測樣本中和試劑使用過程中潛在的交叉反應(yīng)和干擾物質(zhì)，并對干擾和交叉的程度進行量化。

4.2.7.1交叉反應(yīng)研究

交叉反應(yīng)研究涉及將各物質(zhì)加標到不含藥物的樣本中，對加標樣品的重復(fù)性進行評估并對所用代謝物的濃度進行描述。交叉反應(yīng)應(yīng)當考慮結(jié)構(gòu)類似物、合并用藥及主要代謝物的情況，盡可能對以下物質(zhì)進行研究。

4.2.7.1.1結(jié)構(gòu)類似物：葉酸、四氫葉酸、5-甲基四氫葉酸。

4.2.7.1.2合并用藥：6-巰基嘌呤、環(huán)磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶、長春堿、長春新堿、甲基葉酸、異環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、鉑類化合物、艾拉莫德、來氟米特、阿達木單抗、亞葉酸鈣、保泰松、磺胺類藥物。

4.2.7.1.3主要代謝物：7-羥基甲氨蝶呤、４-氨基-４-脫氧-Ｎ-10-甲基蝶酸、2，4-二氨基甲基蝶酸。

4.2.7.2干擾物質(zhì)研究

干擾物質(zhì)研究應(yīng)當考慮常見的內(nèi)源性干擾、外源性干擾和已有報道的干擾物質(zhì)等對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響。

該類產(chǎn)品常見的干擾物包括但不限于以下物質(zhì)：

4.2.7.2.1常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括膽紅素、甘油三酯、膽固醇、尿酸、葉酸及其代謝物、類風(fēng)濕因子、嘌呤、血紅蛋白、白蛋白、人抗鼠抗體等。

4.2.7.2.2常見的外源性干擾物質(zhì)包括：樣本添加劑（包括抗凝劑，促凝劑）等。

4.2.8高劑量鉤狀效應(yīng)（如適用）

一些免疫測定方法可能表現(xiàn)出“高劑量鉤狀效應(yīng)”，即在高濃度時，待測物濃度與響應(yīng)度呈現(xiàn)出與校準曲線相反的數(shù)量關(guān)系。在適用情況下（例如，雙位點或夾心免疫測定法），應(yīng)將線性區(qū)間研究擴展到可報告區(qū)間之外，達到可能在臨床條件下出現(xiàn)的最高濃度，以評估該試劑是否存在高劑量鉤狀效應(yīng)并提交研究資料。

4.2.9線性區(qū)間與可報告區(qū)間

4.2.9.1線性區(qū)間及測量區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當建立試劑的線性區(qū)間時，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9個左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本進行多次重復(fù)檢測，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測次數(shù)。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標準。

當驗證試劑的線性區(qū)間時，需配制覆蓋整個線性區(qū)間的至少5個不同濃度的樣本，每個樣本至少重復(fù)檢測2次。

測量區(qū)間，也稱分析測量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。

4.2.9.2擴展測量區(qū)間和可報告區(qū)間

如對超出測量區(qū)間濃度的樣本可進行稀釋后檢測，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的擴展測量區(qū)間和可報告區(qū)間。兩者上限均為測量區(qū)間上限×稀釋倍數(shù)，擴展測量區(qū)間的下限為測量區(qū)間上限。應(yīng)根據(jù)預(yù)期的臨床意義設(shè)置合適的可報告區(qū)間，并在說明書中進行提示。如用于大劑量甲氨蝶呤治療結(jié)束后濃度監(jiān)測，可報告區(qū)間應(yīng)至少包含0.1μmol/L-10μmol/L；如用于大劑量甲氨蝶呤治療期間濃度監(jiān)測，可報告區(qū)間應(yīng)至少包含0.1μmol/L-40μmol/L區(qū)間。

4.2.10適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型（包括抗凝劑），應(yīng)采用合理方法評價每種樣本類型的適用性。對具有可比性的樣本類型，可選擇具有統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的樣本進行樣本一致性的同源比對研究；對于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對每種樣本類型分別進行分析性能評估。

如果樣本的采集、處理方式存在差別，應(yīng)分析這些差別的潛在影響，并進行針對性的分析性能驗證。

4.2.11反應(yīng)體系

本產(chǎn)品注冊申報時無需提交；由申請人保存，技術(shù)審評需要時應(yīng)提交。

反應(yīng)體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準方法（如有）、質(zhì)控方法、結(jié)果判讀方式等。

5.穩(wěn)定性研究

一般應(yīng)包含研究方案、報告和數(shù)據(jù)。

5.1實時穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

5.2使用穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準品，還應(yīng)提交校準頻率或校準穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

5.3運輸穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。

試劑穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】中進行詳細說明。

6.參考區(qū)間

對于正常未使用相應(yīng)藥物的人群樣本中無可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考區(qū)間的內(nèi)容。

甲氨蝶呤的臨床使用一般包括常規(guī)劑量用藥、大劑量甲氨蝶呤（即：靜脈輸注劑量＞500mg/m2）用藥。藥物在人體內(nèi)的濃度隨時間而變化，因此，不同采血時間點收集的樣本，血藥濃度檢測結(jié)果存在較大差異。此外，應(yīng)用大劑量甲氨蝶呤治療惡性腫瘤時，因用藥方案（例如：靜脈滴注的持續(xù)時間）的不同，臨床上在不同給藥方案、同一采血時間下收集的樣本，甲氨蝶呤濃度也存在較大差異。臨床狀態(tài)復(fù)雜程度、個體對于甲氨蝶呤的要求不同。因此，不推薦將個體的數(shù)值作為變更治療方案的唯一指標，并且，在改變治療方案前，應(yīng)對每名患者進行充分的臨床評估并根據(jù)臨床經(jīng)驗來確立自己的區(qū)間。

7.其他資料

7.1三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

7.2證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。

（四）臨床評價資料

甲氨蝶呤測定試劑已經(jīng)列入《關(guān)于發(fā)布免于臨床試驗體外診斷試劑目錄的通告》免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄中。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進行臨床評價。

申請人也可通過臨床試驗的方式進行產(chǎn)品的臨床評價，臨床試驗的倫理、方案的制定以及報告的撰寫等臨床試驗資料均應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》對臨床評價資料的規(guī)定。

下面僅對臨床評價中的重點問題進行闡述。

1.樣本要求

應(yīng)選擇濃度覆蓋線性/測量區(qū)間的預(yù)期適用人群樣本和干擾樣本進行研究，并注意醫(yī)學(xué)決定水平和測量區(qū)間內(nèi)的各個濃度水平均應(yīng)包含一定數(shù)量的樣本。

樣本采集方式及穩(wěn)定性應(yīng)符合待評價試劑和對比試劑說明書有關(guān)要求。原則上，應(yīng)采用臨床真實樣本進行研究。當真實樣本濃度無法覆蓋檢測范圍時，應(yīng)充分闡述無法獲得的依據(jù)，可適當采用稀釋或者經(jīng)處理去除分析物獲得低濃度樣本、添加分析物獲得高濃度樣本等人工制備樣本。人工制備樣本應(yīng)充分考慮樣本的背景信息，基質(zhì)效應(yīng)等影響因素。

充分考慮不同治療方案人群選擇、地域選擇、年齡范圍、給藥后的時間和抽血時間等與給藥相關(guān)的因素等內(nèi)容，樣本應(yīng)能夠充分評價產(chǎn)品臨床使用的安全性、有效性。

2.方法學(xué)比對

2.1與已上市同類試劑的比對：

應(yīng)選擇與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品（對比試劑）進行比較研究，評價兩種方法檢測結(jié)果的一致性。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗體外診斷試劑具有較好的可比性。

2.2與參考方法的比對：

鑒于與已上市同類試劑的比對所能提供的性能信息較為有限，且抗體對待檢藥物/化合物的反應(yīng)性不同，以及考慮到交叉反應(yīng)等因素，可采用與有資質(zhì)的參考實驗室提供的具有完善的質(zhì)量控制體系的同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和隨訪信息在內(nèi)的臨床信息等進行比對，驗證產(chǎn)品的分析準確度。

3.統(tǒng)計學(xué)分析

在完成數(shù)據(jù)收集后，應(yīng)先繪制散點圖和差異圖，對數(shù)據(jù)進行分析和審查，觀察數(shù)據(jù)是否覆蓋了線性/測量區(qū)間以及是否存在離群值，并初步了解待評價試劑和對比試劑測量值之間的潛在變異特征，確定如何更好地表征這些差異。

然后根據(jù)散點圖和差異圖判斷數(shù)據(jù)是否滿足相應(yīng)的假設(shè)前提，并據(jù)此確定最佳的回歸分析方法。常見的回歸分析方法包括Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析和最小二乘回歸等，并對其進行假設(shè)檢驗以評價二者偏倚。

（五）產(chǎn)品說明書和標簽樣稿

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、檢驗方法、樣本要求、檢測結(jié)果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。藥物檢測試劑通常用于藥物的濃度檢測，從而指導(dǎo)臨床用藥，鑒于其預(yù)期用途的特殊性，說明書中對預(yù)期用途的準確描述、對樣本要求與采集、檢驗結(jié)果的解釋、檢驗方法的局限性、注意事項等內(nèi)容的解釋尤為重要，有助于使用者正確使用試劑，正確解讀結(jié)果。

產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對甲氨蝶呤測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進行編寫。

1.【產(chǎn)品名稱】

試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：甲氨蝶呤測定試劑盒（熒光免疫層析法）等。

2.【預(yù)期用途】

說明試劑（盒）用于體外定量測定人體血清或血漿中甲氨蝶呤的含量，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的臨床研究情況進行確認。

應(yīng)闡述與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證及背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。

3.【檢驗原理】

根據(jù)不同方法學(xué)產(chǎn)品的設(shè)計原理，詳細說明檢驗原理、方法，必要時可采用圖示方法描述。

4.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

4.1試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準品或質(zhì)控品，除明確組成成分及生物學(xué)來源外，校準品還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標準物質(zhì)或參考物的編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。

4.2對于非試劑組分，如試驗用耗材（如塑料滴管）、定值單（靶值單）、校準卡等，應(yīng)注明相關(guān)信息。

4.3對于試劑盒中不包含，但對檢驗必需的試劑組分，應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度、配制方法及其他相關(guān)信息。

4.4對于液質(zhì)聯(lián)用類方法，其主要組成成分建議包含流動相、內(nèi)標校準品（如使用內(nèi)標定量）、校準品、質(zhì)控品、樣本提取劑等。

5.【儲存條件及有效期】

應(yīng)明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。明確開封后的待機穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。

增加“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期見標簽”的字樣。

注：保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位；對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.【樣本要求】

應(yīng)在以下幾方面進行說明：

6.1適用的樣本類型。

6.2在樣本收集、處理過程中的特別注意事項。

6.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等。

6.4已知的干擾物。

6.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法。

6.6甲氨蝶呤濃度與用藥時間相關(guān)，應(yīng)根據(jù)臨床需求盡量保證每次給藥時間及采血時間的準確性。

7.【檢驗方法】

詳細說明實驗操作的各個步驟及每一步驟時間和溫度要求。包括：

7.1試驗具體操作步驟及結(jié)果計算方式。

7.2試劑配制方法、注意事項。

7.3試驗條件：溫度、時間、配套使用設(shè)備信息等以及試驗過程中的注意事項。液質(zhì)聯(lián)用方法學(xué)產(chǎn)品建議注明色譜分離以及質(zhì)譜檢測相關(guān)條件，包括但不限于色譜柱填料類型、洗脫原理、推薦的流動相洗脫條件、質(zhì)譜離子化方式、監(jiān)測模式等。

7.4校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。應(yīng)注明推薦的儀器校準周期。

7.5質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等，如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

8.【參考區(qū)間】

對于未使用相應(yīng)藥物的正常人群樣本中無可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考區(qū)間的內(nèi)容。

企業(yè)可根據(jù)對于藥物治療范圍的研究進行描述。由于治療范圍取決于所采用的方法學(xué)和個體患者的臨床狀態(tài)，具體的治療范圍通常不適用于目前的甲氨蝶呤檢測。

應(yīng)對用戶說明缺乏確定的治療范圍的警告性解釋，并應(yīng)就患者差異和測試差異進行討論。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】

說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；說明在何種情況下需要進行確認試驗。

若超過線性區(qū)間上限的高濃度樣本可稀釋后測定，則應(yīng)說明樣本的最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息并提供經(jīng)確認的稀釋程序。

10.【檢驗方法的局限性】

說明檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)；說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，說明該檢驗方法的局限性。

（六）質(zhì)量管理體系文件

 申請人應(yīng)當在申請注冊時提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確甲氨蝶呤檢測試劑的產(chǎn)品反應(yīng)及檢測原理和過程，標明主要控制點與項目及主要原材料、采購件的來源及質(zhì)量控制方法。

如適用，應(yīng)當提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對比說明。

三、參考文獻

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