附件：I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊審查指導(dǎo)原則（2025年第6號）.doc

I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品注冊申報(bào)資料的一般要求，申請人需依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，需在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則所涉及的I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品，是指所用原材料限定于由動物（牛、豬、鼠、魚等）的組織（皮膚、肌腱、骨骼等）提取、分離及純化（交聯(lián)或非交聯(lián)）得到的I型膠原蛋白，可采用不同的物理、化學(xué)交聯(lián)方法及其它工藝制備而成的凝膠狀支架產(chǎn)品。

該指導(dǎo)原則不適用于重組膠原蛋白制成的產(chǎn)品，也不包括含細(xì)胞（如軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞）、生物因子（如干細(xì)胞生長因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白）等的產(chǎn)品，亦不包括預(yù)期與細(xì)胞或生物活性因子組合使用的產(chǎn)品。相關(guān)藥械組合產(chǎn)品應(yīng)遵循其它相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或指導(dǎo)原則等的要求，復(fù)合其他材料制備的特殊設(shè)計(jì)及其他軟骨修復(fù)產(chǎn)品可參考本指導(dǎo)原則中適用的部分。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品的命名需采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的通用名稱，或以產(chǎn)品臨床預(yù)期用途、固化方式、適用部位為依據(jù)命名，需符合《醫(yī)療器械通用名稱命名規(guī)則》等相關(guān)法規(guī)的要求。

2.分類編碼

根據(jù)《醫(yī)療器械分類目錄》，分類編碼為13-10，管理類別為III類。

（一）綜述資料

1.產(chǎn)品描述

需全面描述產(chǎn)品I型膠原蛋白及其它成分的含量、純度及來源，產(chǎn)品結(jié)構(gòu)形式（產(chǎn)品組件的結(jié)構(gòu)示意圖和/或?qū)嵨飯D）、主要成型工藝、工作原理、交付狀態(tài)、滅菌方式及貨架有效期等，以及區(qū)別于其他同類產(chǎn)品的特征等。

2.作用機(jī)理

需描述產(chǎn)品的作用機(jī)理，建議提供產(chǎn)品的操作步驟說明及圖示。

3.產(chǎn)品適用范圍和禁忌證

產(chǎn)品的適用范圍、適用人群、禁忌證需與申報(bào)產(chǎn)品的性能和功能相符。

3.1適用范圍

適用范圍的表述需客觀、清晰，使用有明確定義或行業(yè)公認(rèn)的術(shù)語或名詞。I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品一般用于限定面積的軟骨缺損的修復(fù)，需明確預(yù)期手術(shù)術(shù)式、植入部位、缺損面積及與其組合使用的其它器械和醫(yī)療產(chǎn)品。

3.2預(yù)期使用環(huán)境

明確預(yù)期使用的地點(diǎn)（如醫(yī)療機(jī)構(gòu)的條件），說明可能影響其安全性和有效性的環(huán)境條件。

3.3適用人群

明確目標(biāo)患者人群信息、患者選擇標(biāo)準(zhǔn)信息以及明確使用過程中需要考慮的因素。

3.4禁忌證

如適用，通過風(fēng)險(xiǎn)/受益評估后，針對某些疾病、情況或特定的人群，認(rèn)為不推薦使用該產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)明確說明，如對產(chǎn)品材料成分過敏的人群。

4.產(chǎn)品型號規(guī)格

提供產(chǎn)品各型號規(guī)格的劃分原則。對于存在多種型號、規(guī)格的產(chǎn)品，需明確各型號、規(guī)格的區(qū)別，采用對比表及帶有說明性文字的圖片、圖表，對各種型號、規(guī)格的結(jié)構(gòu)組成、功能、產(chǎn)品特征、性能指標(biāo)等方面加以描述。需提供體現(xiàn)產(chǎn)品設(shè)計(jì)特征的關(guān)鍵信息，如成分配比、體積或重量、產(chǎn)品裝量等。

5.與同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品的比較信息

應(yīng)當(dāng)提供同類產(chǎn)品（國內(nèi)外已上市）或前代產(chǎn)品（如有）的信息，闡述申請注冊產(chǎn)品的研發(fā)背景和目的。對于同類產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)說明選擇其作為研發(fā)參考的原因。

申請人需綜述同類產(chǎn)品國內(nèi)外研究及臨床使用現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢，同時(shí)列表比較說明申報(bào)產(chǎn)品與參考產(chǎn)品（同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品）在材料工作原理、結(jié)構(gòu)組成、制造材料、性能指標(biāo)、適用范圍、作用方式、臨床應(yīng)用技術(shù)等方面的異同。明確產(chǎn)品有無使用新材料、新的活性成分、新技術(shù)、新設(shè)計(jì)或具有新作用機(jī)理和新功能。

6.包裝說明

提供產(chǎn)品的包裝信息，包括包裝形式、包裝材料、包裝工藝。對于具有微生物限度要求的醫(yī)療器械，應(yīng)當(dāng)說明保持其微生物限度的包裝信息。說明如何確保最終使用者可清晰地辨識包裝的完整性。

（二）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料

注冊申請人需對產(chǎn)品全生命周期實(shí)施風(fēng)險(xiǎn)管理，提交風(fēng)險(xiǎn)管理資料（參照GB/T 42062《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》），充分識別產(chǎn)品的設(shè)計(jì)、原材料、制造過程、產(chǎn)品包裝、滅菌、運(yùn)輸、貯存、使用等產(chǎn)品生命周期內(nèi)各個(gè)環(huán)節(jié)的安全特征，從生物學(xué)危險(xiǎn)（源）、環(huán)境危險(xiǎn)（源）等方面，對產(chǎn)品進(jìn)行全面的風(fēng)險(xiǎn)分析，并詳述所采取的風(fēng)險(xiǎn)控制措施。動物源性來源產(chǎn)品宜參考YY/T 0771標(biāo)準(zhǔn)、《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則》（2017年修訂版）提供風(fēng)險(xiǎn)分析報(bào)告。

風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告需包括生產(chǎn)和生產(chǎn)后信息，具體內(nèi)容參考GB/T 42062第9章和《醫(yī)療器械安全和性能的基本原則》的2.1.2e)f)。產(chǎn)品變更注冊和已在境外上市產(chǎn)品注冊時(shí)，申報(bào)資料中的風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告需包括上述內(nèi)容，將風(fēng)險(xiǎn)管理貫穿于產(chǎn)品的全生命周期。

2.醫(yī)療器械安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《醫(yī)療器械安全和性能基本原則清單》各項(xiàng)適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求需符合醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則、相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)法律、法規(guī)的相應(yīng)要求。在此基礎(chǔ)上，注冊申請人需根據(jù)產(chǎn)品的特點(diǎn)，制定確保產(chǎn)品安全、有效的技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求中試驗(yàn)方法需依據(jù)有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國際標(biāo)準(zhǔn)制訂，或經(jīng)過充分的驗(yàn)證。

3.1產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分的說明

列表說明產(chǎn)品的型號、規(guī)格，明確產(chǎn)品型號、規(guī)格的劃分說明，明示產(chǎn)品組成及結(jié)構(gòu)。推薦采用圖示和/或表格的方式。

3.2性能指標(biāo)

根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇適用的項(xiàng)目進(jìn)行規(guī)定，例如外觀（如性狀、顏色）、可見異物、裝量、膠原蛋白含量、復(fù)合成分含量（若適用）、總糖含量、脂肪含量、雜蛋白分析、水分、酸堿度、熾灼殘?jiān)?、酸水解產(chǎn)物、色氨酸檢查（去端肽時(shí)）、重金屬總量和微量元素、添加劑（包括溶劑）殘留、交聯(lián)劑殘留（若適用）、無菌性、環(huán)氧乙烷殘留（若適用）、細(xì)菌內(nèi)毒素等。建議設(shè)定凝膠化相關(guān)的性能。

若使用容器包裝（如預(yù)灌封注射器），并包含配合使用的附件（如注射針），應(yīng)制定相關(guān)適用的性能指標(biāo)（如預(yù)灌封注射器性能指標(biāo)、注射針性能指標(biāo)，及推擠力、可注射性能等）。

3.3檢驗(yàn)方法

產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗(yàn)方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（可參考本指導(dǎo)原則參考文獻(xiàn)中引用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)）；非標(biāo)準(zhǔn)化檢驗(yàn)方法需提供相應(yīng)的方法學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)，同時(shí)保證檢驗(yàn)方法具有可操作性和可重現(xiàn)性，必要時(shí)可附相應(yīng)圖示進(jìn)行說明，文本較大的可以附錄形式提供。

3.4附錄

產(chǎn)品材料的理化性能特征，以資料性附錄形式體現(xiàn)。對于膠原材料，一般需考慮膠原蛋白分子量（含動力黏度）、膠原蛋白純度、肽圖，同時(shí)建議考慮膠原蛋白高級結(jié)構(gòu)分析、膠原蛋白自組裝性能、熱穩(wěn)定性、膠原蛋白-細(xì)胞相互作用等。附錄中可不包含原材料各項(xiàng)性能指標(biāo)的具體檢驗(yàn)方法。

4.研究資料

注冊申請人需提供產(chǎn)品技術(shù)要求的研究和編制說明，包括功能性、安全性指標(biāo)的確定依據(jù)，所采用的標(biāo)準(zhǔn)或方法、采用的原因及理論基礎(chǔ)，申請人需建立測試方法的方法學(xué)驗(yàn)證。

需提供產(chǎn)品材料和產(chǎn)品設(shè)計(jì)相關(guān)理化及生物性能的研究資料，并提供其可接受的依據(jù)，必要時(shí)，與已上市同類產(chǎn)品相關(guān)性能進(jìn)行對比，以證明其安全有效性。研究資料選擇適用的項(xiàng)目進(jìn)行研究驗(yàn)證，主要包括但不限于如下研究項(xiàng)目：

4.1化學(xué)/材料表征研究

4.1.1膠原蛋白材料表征

需明確產(chǎn)品I型膠原的具體來源及其制備工藝。膠原蛋白材料的表征至少需包括如下項(xiàng)目：

4.1.1.1 I型膠原蛋白分子量

采用電泳法測定膠原蛋白分子量時(shí)，按照YY/T1805.2《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 膠原蛋白 第2部分 I型膠原蛋白分子量檢測十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法》進(jìn)行測試。非變性條件下，膠原蛋白分子量可用分子排阻色譜法檢測，具體方法參照《組織工程醫(yī)療器械 膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行。

4.1.1.2 I型膠原蛋白純度

按照《中華人民共和國藥典》“色譜法”的 “分子排阻色譜法”測定，按面積歸一化法計(jì)算純度。

膠原蛋白具有其他蛋白所沒有的三股螺旋結(jié)構(gòu)，可以在特異性的膠原蛋白酶作用下水解形成小分子多肽或者氨基酸；而非膠原蛋白卻不會受到膠原蛋白酶的水解作用。因此，可以利用膠原蛋白酶水解樣品，結(jié)合考馬斯亮藍(lán)對牛血清白蛋白染色極限的確定，檢測膠原蛋白樣品中所含雜蛋白總量，進(jìn)而通過相應(yīng)計(jì)算得到膠原蛋白純度。具體方法參照《組織工程醫(yī)療器械 膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行。

4.1.1.3 肽圖

按照《中華人民共和國藥典》“肽圖檢查法”規(guī)定的方法進(jìn)行。

4.1.1.4其它

隨著相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的更新，需進(jìn)一步開展膠原蛋白高級結(jié)構(gòu)分析、膠原蛋白自組裝性能（非交聯(lián)產(chǎn)品）、端肽去除程度（若適用）、熱穩(wěn)定性、膠原蛋白-細(xì)胞相互作用等研究。

4.1.2產(chǎn)品組成成分表征

4.1.2.1 I型膠原蛋白鑒別

紅外分光光度法、拉曼光譜法、特征多肽測定法、免疫印跡法、酶聯(lián)免疫法等可用于膠原蛋白鑒別，宜選擇一種或多種方法進(jìn)行膠原蛋白來源動物種屬和/或型別的鑒別。也可選擇其他經(jīng)驗(yàn)證的方法進(jìn)行膠原蛋白的鑒別。

4.1.2.2膠原蛋白含量

膠原蛋白含量可用總蛋白含量和純度計(jì)算?？偟鞍缀康臏y定按照YY/T 1511附錄A“凱氏定氮法蛋白含量測定”進(jìn)行，或按照《中華人民共和國藥典》“蛋白質(zhì)含量測定法 第三法 雙縮脲法”進(jìn)行測定。若使用凱氏定氮法，需明確和驗(yàn)證氮轉(zhuǎn)換為膠原蛋白的換算系數(shù)。

羥脯氨酸是膠原蛋白中含有的特異性氨基酸，分析測定羥脯氨酸含量后，可以計(jì)算出膠原蛋白的含量，可參照YY/T 0954《無源外科植入物 I型膠原蛋白植入劑》規(guī)定的方法進(jìn)行。

4.1.2.3 總糖含量

參照《組織工程醫(yī)療器械 膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行。

4.1.2.4脂肪含量

可參照GB 5009.6《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測定》的規(guī)定進(jìn)行測定。

4.1.2.5伴生的其他類型膠原

與I型膠原伴生的其他型別的膠原對I型膠原自組裝有影響，應(yīng)評估和控制其在終產(chǎn)品中的含量，以確保產(chǎn)品批次間的一致性。其中，III型膠原作為I型膠原主要的伴生膠原，可以采用天狼猩紅染色或者更精確的免疫組化、免疫熒光、ELISA等技術(shù)對I型和III型膠原進(jìn)行鑒別與量化。

4.1.2.6重金屬總量和微量元素

其中，重金屬總量以鉛（Pb）計(jì)。取膠原熾灼殘?jiān)逻z留的殘?jiān)?，按照《中華人民共和國藥典》0821重金屬檢查法第二法進(jìn)行。

微量元素按照《中華人民共和國藥典》 “原子吸收分光光度法”、“電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法”、“電感耦合等離子體質(zhì)譜法”或相當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行測定。

4.1.2.7有毒物殘留

I型膠原提取制備過程中，可能存在有毒成分如三氯甲烷、過氧乙酸等殘留。參照《中華人民共和國藥典》相應(yīng)檢測方法進(jìn)行測試。

4.1.2.8酸堿度

酸堿度（pH值）是影響膠原分子發(fā)生自組裝的關(guān)鍵條件，pH為7.0-7.5 的膠原溶液可以順利地形成凝膠且成膠時(shí)間和成膠效果不會受到明顯的影響。按照《中華人民共和國藥典》 四部通則0631的pH值測定法，取膠原凝膠前驅(qū)體溶液，采用酸度計(jì)測定pH值。

4.1.2.9外源性DNA殘留

按照《中華人民共和國藥典》四部3407外源性DNA殘留量測定法“熒光染色法”或“定量PCR法”進(jìn)行。或者參照YY/T 1876《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 動物源性生物材料DNA殘留量測定法：熒光染色法》中規(guī)定方法測試。

4.1.2.10 α-Gal抗原殘留

α-半乳糖基抗原（簡稱 Gal 抗原）是動物組織、器官移植到人體引起超急性免疫排斥反應(yīng)的主要靶抗原，廣泛存在于牛、豬和其他低等動物體內(nèi)，人體由于有 2 個(gè)堿基錯(cuò)位變異而不表達(dá) Gal 抗原，但人血清中存在高滴度的抗-Gal 抗體，因此當(dāng)人體接受含有 Gal 抗原的組織或生物材料時(shí)就會引起補(bǔ)體介導(dǎo)的抗體依賴型細(xì)胞毒性效應(yīng)，引起免疫排斥及免疫毒理反應(yīng)。Gal 抗原缺失小鼠已被廣泛應(yīng)用于異種免疫原性評價(jià)。參照YY/T 1561《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 動物源性支架材料殘留α-Gal抗原檢測》中規(guī)定方法進(jìn)行測試。

4.1.2.11 EO殘留

對于經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌后產(chǎn)品的EO殘留量的可耐受接觸限量，建議參考GB/T 16886.7《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第7部分：環(huán)氧乙烷殘留量》中4.3.5.2的要求進(jìn)行規(guī)定。

4.2物理和機(jī)械性能研究

4.2.1凝膠化性能和可注射性

凝膠化性能對原位注射賦型的膠原水凝膠非常重要，若適用，可以通過傾斜法、濁度法、光散射法以及動態(tài)流變儀等檢測手段表征膠原分子聚合動力學(xué)、聚合能力、凝膠化時(shí)間等。

4.2.1.1凝膠化性能

宜確定產(chǎn)品的凝膠化時(shí)間，可采取已經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證的測試方法，例如管傾斜試驗(yàn)和動態(tài)流變學(xué)測試等。凝膠交聯(lián)度在很大程度上影響著物理性能，實(shí)際交聯(lián)程度與理論交聯(lián)程度的比值可直接反映交聯(lián)度，故在適用的情況下，推薦測定產(chǎn)品的交聯(lián)程度。在某些情況下，可簡單地通過計(jì)算成膠后浸出物的比例來反映水凝膠交聯(lián)程度。

4.2.1.2可注射性

主要考慮宏觀可注射性，通過壓縮實(shí)驗(yàn)檢測推動注射器所需力大小，考察不同條件下（儲存時(shí)間、注射濃度、溫度、針頭大小等）其可注射性能。鼓勵(lì)測量剪切粘度變化，進(jìn)行剪切變稀表征。

4.2.2水性環(huán)境下的形態(tài)穩(wěn)定性

4.2.2.1溶脹或收縮性能

正常軟骨的含水率較高，維持著良好的營養(yǎng)物質(zhì)透過性能，高的含水率有利于支架材料相關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)的滲透運(yùn)輸。建議通過測定材料浸泡前后的質(zhì)量或者體積變化對材料的溶脹速率、或收縮性能進(jìn)行表征。

4.2.2.2保水性

制備好的水凝膠放置在手術(shù)的正常條件下，記錄溫濕度變化，在一段時(shí)間內(nèi)測定凝膠的質(zhì)量變化，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示。前后質(zhì)量差與初始質(zhì)量之比定義為質(zhì)量變化百分比。

4.2.3力學(xué)性能

機(jī)械性能或者粘彈性在影響細(xì)胞行為與細(xì)胞誘導(dǎo)的基質(zhì)重塑中具有重要作用。根據(jù)材料的形態(tài)與大小選擇，可通過流變儀、動態(tài)力學(xué)分析儀、納米壓痕儀等對膠原水凝膠力學(xué)性能（壓縮、剪切等模式）與粘彈性（蠕變、應(yīng)力松弛、動態(tài)力學(xué)）進(jìn)行測試。需注意材料模量等與組織的匹配度及其在體內(nèi)生物力學(xué)微環(huán)境影響下的穩(wěn)定性。

4.2.3.1彈性模量

可以以動態(tài)力學(xué)分析儀對樣品進(jìn)行壓縮測試，分析其壓縮曲線，在低形變線性彈性區(qū)計(jì)算樣品的彈性模量。

4.2.3.2蠕變和應(yīng)力松弛

宜在應(yīng)力松弛表征時(shí)，固定材料形變，觀察應(yīng)力隨時(shí)間的變化趨勢；在蠕變行為表征時(shí)，固定材料的初始應(yīng)力，觀察形變隨時(shí)間的變化趨勢。

4.2.3.3抗疲勞性能

對于承重部位的軟骨，在人的日常活動中要經(jīng)歷反復(fù)的擠壓，因此對于膠原水凝膠軟骨修復(fù)材料的抗疲勞力學(xué)性能也提出了相應(yīng)的要求?？刹捎冕槍σ后w浸沒式材料的動態(tài)力學(xué)分析儀等儀器對水凝膠的抗疲勞性能進(jìn)行考察，通過壓縮加載-卸載循環(huán)研究水凝膠的能量耗散，膠原水凝膠樣品被壓縮到一定應(yīng)變下循環(huán)若干次。建議根據(jù)應(yīng)力應(yīng)變定義出能量耗散方程，并得出樣品的循環(huán)壓縮強(qiáng)度。

4.2.3.4 體外組織結(jié)合性能

若其他理化性能測試不足以判定產(chǎn)品在軟骨缺損部位的固位能力，建議申請人利用體外模型進(jìn)行產(chǎn)品與組織結(jié)合性能的研究，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

4.2.4微觀結(jié)構(gòu)

膠原水凝膠的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)模擬了細(xì)胞外基質(zhì)的微觀結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞的粘附、鋪展和分化?？蓪⑺z樣品經(jīng)液氮處理后凍干，通過掃描電子顯微鏡觀察纖維形態(tài)、直徑、分布以及多孔結(jié)構(gòu)。拍攝后的圖像可采用Image J等圖像處理軟件對其進(jìn)行處理和數(shù)據(jù)收集，而后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，但凍干過程引起了凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)改變，故僅作為間接評價(jià)方法?；蛘?，水凝膠樣品直接采用低溫掃描電子顯微鏡或環(huán)境掃描電子顯微鏡對樣品的孔結(jié)構(gòu)、纖維形態(tài)等進(jìn)行表征。

4.2.5傳質(zhì)性能

物質(zhì)傳遞性能指細(xì)胞、營養(yǎng)、廢物物質(zhì)向基質(zhì)中或者在基質(zhì)中擴(kuò)散的能力，可通過熒光染料-共聚焦顯微鏡、擴(kuò)散室、光密度分析等表征。材料需有利于細(xì)胞黏附、遷移和增殖；有利于氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)傳輸；有利于代謝物的排出和組織的長入。

為檢測膠原水凝膠營養(yǎng)物質(zhì)的透過性能，可采用氯化鈉作為營養(yǎng)物質(zhì)中離子性物質(zhì)的代表，色氨酸作為小分子營養(yǎng)物質(zhì)的代表，測定氯化鈉和色氨酸的透過率；同時(shí)，可通過共聚焦顯微鏡觀察熒光蛋白分子的擴(kuò)散來表征水凝膠對蛋白分子的透過率。

4.3生物學(xué)特性研究

4.3.1生物相容性評價(jià)資料

生物相容性評價(jià)應(yīng)遵循GB/T 16886.1《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評價(jià)與試驗(yàn)》相關(guān)要求，生物相容性評價(jià)資料可以參考《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)指南》，結(jié)合產(chǎn)品的預(yù)期接觸部位和累積使用的接觸時(shí)間，必要時(shí)開展生物學(xué)試驗(yàn)。生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)終點(diǎn)一般包括細(xì)胞毒性、致敏、刺激或皮內(nèi)反應(yīng)、材料介導(dǎo)的致熱性、急性全身毒性、亞急性毒性、慢性毒性、亞慢性毒性、植入反應(yīng)、遺傳毒性和致癌性。需結(jié)合物理和/或化學(xué)表征、降解性能等論證產(chǎn)品在上述各項(xiàng)生物學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評定終點(diǎn)的安全性。

4.3.2產(chǎn)品與細(xì)胞相互作用研究

對產(chǎn)品與軟骨修復(fù)相關(guān)的材料-細(xì)胞相互作用性能進(jìn)行評價(jià)，一般可開展產(chǎn)品對細(xì)胞的粘附、遷移、增殖、分化等影響的生物學(xué)性能評價(jià)試驗(yàn)?？蓞⒖肌督M織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 軟骨支架與細(xì)胞相互作用的評價(jià)試驗(yàn)》等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)方法。

在擬進(jìn)行體外模擬研究而設(shè)定體外試驗(yàn)參數(shù)時(shí)，宜充分考慮與產(chǎn)品修復(fù)再生關(guān)節(jié)軟骨相關(guān)的體內(nèi)因素，如細(xì)胞類型、細(xì)胞數(shù)量、力學(xué)刺激等。用作體外研究的產(chǎn)品樣品宜具有代表性，需注意樣品尺寸（厚度）與申報(bào)產(chǎn)品的差異對體外試驗(yàn)結(jié)果的影響。體外細(xì)胞試驗(yàn)宜選擇預(yù)期體內(nèi)發(fā)揮修復(fù)再生作用的主要細(xì)胞類型，細(xì)胞接種方式、細(xì)胞接種數(shù)量要能與植入后初期/早期能長入/遷移入產(chǎn)品的方式和細(xì)胞數(shù)量相適宜。需要對采用的細(xì)胞培養(yǎng)條件提供合理化理由，例如考慮體內(nèi)軟骨修復(fù)時(shí)的體液環(huán)境/軟骨的營養(yǎng)方式等，可考慮采用無血清培養(yǎng)基或低百分比含量血清的培養(yǎng)基、低氧培養(yǎng)條件等。體外細(xì)胞試驗(yàn)也可考慮施加力學(xué)刺激，例如靜水壓。

4.3.3生物安全性評價(jià)資料

可參照《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的要求提供產(chǎn)品免疫原性評價(jià)資料以及病毒滅活評價(jià)資料。

Ⅰ型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的免疫原性的研究、評價(jià)與控制資料主要包括：免疫原性毒理學(xué)/臨床相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)資料、免疫毒理學(xué)試驗(yàn)資料、免疫原性風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的質(zhì)量控制資料以及免疫原性相關(guān)不良事件資料等。應(yīng)對熱原進(jìn)行控制，致熱反應(yīng)推薦采用家兔法。且應(yīng)將內(nèi)毒素水平控制列入出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目。對于通過提純?nèi)コ庖咴晕镔|(zhì)的Ⅰ型膠原蛋白，可通過雜蛋白的含量指標(biāo)進(jìn)行控制；對于通過脫細(xì)胞工藝去除免疫原性物質(zhì)的Ⅰ型膠原蛋白，應(yīng)考慮殘留細(xì)胞數(shù)量、殘留DNA數(shù)量和/或殘留α-Gal抗原的數(shù)量等指標(biāo)。注冊申請人宜根據(jù)具體產(chǎn)品特性，考慮需增加的性能研究項(xiàng)目，如端肽、損傷相關(guān)的分子模式、核酸降解酶以及特異性抗體檢測，對于以上列舉的項(xiàng)目中，如有不適用項(xiàng)，亦應(yīng)說明具體理由。

在選擇免疫學(xué)評價(jià)項(xiàng)目和設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案時(shí)應(yīng)充分考慮人與實(shí)驗(yàn)動物的種屬差異。Gal抗原缺失動物可能是評價(jià)動物源性生物材料免疫原性的合適模型。如果結(jié)合“植入材料特異性抗體檢測”，可以同時(shí)檢測特異性抗Gal抗體之外的材料特異性抗體。

在參考GB/T 16886.20分析選擇體外免疫學(xué)試驗(yàn)時(shí)，要充分考慮樣品制備的合理性，比如使用浸提液用于實(shí)驗(yàn)樣品時(shí)要充分分析和證明抗原物質(zhì)全部被有效浸提出來，客觀地分析實(shí)驗(yàn)體系的局限性。建議參考最新文獻(xiàn)研究，合理選擇體外免疫學(xué)試驗(yàn)方法，客觀評價(jià)異種免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)于病毒滅活，若產(chǎn)品采用常見的工藝，如有機(jī)物、射線、強(qiáng)酸等，其過程和方法相對成熟，申請人可采用文獻(xiàn)或歷史數(shù)據(jù)對病毒滅活效果進(jìn)行評價(jià)，必要時(shí)針對申報(bào)產(chǎn)品開展病毒滅活試驗(yàn)驗(yàn)證。鑒于產(chǎn)品主要成分為膠原，宜考慮病毒滅活工藝對膠原性能的影響，以及對產(chǎn)品有效性的影響。

4.4體外降解性能

適宜的降解行為對軟骨組織修復(fù)具有重要作用，需要關(guān)注材料的降解性能。

4.4.1組成成分變化

宜對不同時(shí)間點(diǎn)降解產(chǎn)物進(jìn)行組成成分（如氨基酸和多肽）的分析。

4.4.2宏觀形貌變化

宜采用相機(jī)、光學(xué)顯微鏡等對降解不同程度的材料進(jìn)行宏觀形貌的表征。

4.4.3體積和質(zhì)量的變化

宜在PBS溶液或膠原蛋白酶溶液環(huán)境下，在指定時(shí)間點(diǎn)對樣品體積和質(zhì)量進(jìn)行測定。樣品的降解率以質(zhì)量變化率或者體積變化率表示，通過記錄樣品在不同時(shí)間點(diǎn)的降解率，獲得其隨時(shí)間變化的規(guī)律。

4.5動物試驗(yàn)研究

4.5.1動物試驗(yàn)決策及設(shè)計(jì)

需按照《醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則》決策是否需開展動物試驗(yàn)研究。如開展動物試驗(yàn)研究，需按照《醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施質(zhì)量保證》進(jìn)行，并遵循3R原則。需關(guān)注動物模型建立的科學(xué)性和合理性，以及對臨床的借鑒意義。

對于I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品，體內(nèi)降解動物試驗(yàn)研究可與常規(guī)動物試驗(yàn)研究合并開展。I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的動物試驗(yàn)可以使用兔、犬、豬、羊等不同種屬的動物模型，采用形態(tài)學(xué)、組織生物化學(xué)、生物力學(xué)分析等進(jìn)行評價(jià)。動物試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)宜明確的關(guān)鍵內(nèi)容見本指導(dǎo)原則附錄。

4.5.2實(shí)驗(yàn)動物模型的選擇

實(shí)驗(yàn)動物模型應(yīng)符合動物試驗(yàn)?zāi)康?，建立合適的動物疾病模型用于研究，并詳細(xì)說明選擇實(shí)驗(yàn)動物模型的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量應(yīng)保證結(jié)果具有可靠性，并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)考慮。如選擇的實(shí)驗(yàn)動物模型對于產(chǎn)品應(yīng)用于人體的安全性分析具有局限性，需對研究結(jié)果的影響進(jìn)行詳細(xì)說明。

研發(fā)產(chǎn)品的生物學(xué)效應(yīng)、機(jī)械性能、降解周期、降解產(chǎn)物同組織的相容性及組織反應(yīng)研究中，宜盡量選用符合相關(guān)國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動物，有效性評價(jià)建議包含大動物試驗(yàn)。需要考慮I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的固定方式以及材料脫落風(fēng)險(xiǎn)。

4.5.3受試器械、對照品和實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量

注冊申請人應(yīng)對使用的受試器械和對照品進(jìn)行詳細(xì)的描述，包括產(chǎn)品名稱、結(jié)構(gòu)及組成（含配合使用的附件）、型號規(guī)格、使用數(shù)量、是否重復(fù)使用等信息。受試器械應(yīng)為典型性產(chǎn)品，對照品宜優(yōu)先選擇已上市的同類器械作為對照品，或?qū)φ张R床常用的有效修復(fù)技術(shù)。適當(dāng)時(shí)，動物試驗(yàn)中可設(shè)立陰性對照組和（或）空白對照組。

實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量可結(jié)合研究目的、研究假設(shè)（如適用）、文獻(xiàn)信息、同類產(chǎn)品經(jīng)驗(yàn)等方面估計(jì)動物試驗(yàn)數(shù)量，受試器械組關(guān)鍵觀察點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量的設(shè)定需考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)分析需要。另一方面，建議預(yù)估動物試驗(yàn)數(shù)量時(shí)，考慮因各種原因?qū)е聦?shí)驗(yàn)動物過早死亡的情況。

4.5.4動物試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間

動物試驗(yàn)的觀察時(shí)間宜根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，評價(jià)指標(biāo)及降解周期選擇研究持續(xù)時(shí)間，同時(shí)宜參考同類產(chǎn)品的研究情況。建議觀察時(shí)間點(diǎn)及觀察指標(biāo)參考YY/T 0606.10。動物試驗(yàn)應(yīng)能觀察到產(chǎn)品降解特征且應(yīng)觀察到產(chǎn)品完全降解、吸收，并且產(chǎn)品對靶組織及其他組織（如適用）的影響達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。在研究中應(yīng)選擇多個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，其設(shè)定應(yīng)有合理依據(jù)。

4.5.5評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

按照臨床標(biāo)準(zhǔn)推薦的療效指標(biāo)進(jìn)行評價(jià)，并表征產(chǎn)品的降解特征。

在動物試驗(yàn)中，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行完整的尸檢，包括大體和詳細(xì)的組織病理學(xué)檢查，評估指標(biāo)至少包括產(chǎn)品降解、組織再生等情況。建議評價(jià)指標(biāo)詳見本指導(dǎo)原則附錄。

4.5.6動物試驗(yàn)方案和報(bào)告要求

動物試驗(yàn)研究方案和研究報(bào)告應(yīng)至少包括但不局限于以下內(nèi)容：

試驗(yàn)?zāi)康?/p>

試驗(yàn)器材或試劑

動物的種類、數(shù)量及該種類作為受試動物的合理性解釋及

選擇依據(jù)

試驗(yàn)方法（樣品準(zhǔn)備、動物準(zhǔn)備、手術(shù)方法）、術(shù)前準(zhǔn)備、

目標(biāo)器官/組織、手術(shù)切口控制等

對照組類型和/或?qū)φ债a(chǎn)品的類型和選取依據(jù)

動物模型的種類及建立方法

產(chǎn)品的使用步驟及時(shí)間

觀察方法、觀察指標(biāo)與觀察周期

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析過程

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)與試驗(yàn)結(jié)論

有效性標(biāo)準(zhǔn)

安全性指標(biāo)

試驗(yàn)研究的結(jié)論

4.6滅菌工藝研究

描述用于保證產(chǎn)品無菌的質(zhì)量保證體系，明確滅菌工藝（方法和參數(shù)）和無菌保證水平（SAL）。采取終端滅菌的I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的無菌保證水平（SAL）需達(dá)到10-6。

該類產(chǎn)品一般為滅菌包裝交付，需提供滅菌工藝驗(yàn)證報(bào)告。對于經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的產(chǎn)品，需提供滅菌結(jié)果確認(rèn)和過程控制報(bào)告，具體可參照GB 18279系列標(biāo)準(zhǔn)。

對于經(jīng)輻照滅菌的產(chǎn)品，需明確射線種類、輻照劑量及相關(guān)的驗(yàn)證報(bào)告。需評價(jià)滅菌方法（包括不同輻照源）對于產(chǎn)品性能的影響，并提供驗(yàn)證性能的確定依據(jù)、驗(yàn)證方案及報(bào)告以及接受指標(biāo)的確定依據(jù)，具體可參照GB 18280系列標(biāo)準(zhǔn)。

滅菌過程可對水凝膠或其他添加物質(zhì)(例如賦形劑等)的性質(zhì)產(chǎn)生影響。這些都宜在分析表征數(shù)據(jù)時(shí)加以考慮。在某種類別的水凝膠不適用常規(guī)滅菌方法時(shí)，宜在無菌條件下生產(chǎn)水凝膠,并考慮增加控制措施，例如參考藥品《除菌過濾技術(shù)及應(yīng)用指南》進(jìn)行除菌過濾，提供相應(yīng)的驗(yàn)證資料。需注意，經(jīng)過濾的膠原溶液的黏度可能改變分子量，宜在除菌過濾驗(yàn)證資料中加以評估。

4.7穩(wěn)定性研究

申報(bào)產(chǎn)品需參照《無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則》提供產(chǎn)品穩(wěn)定性研究資料。在此基礎(chǔ)上，宜將水凝膠產(chǎn)品儲存在溫度和pH值可調(diào)控的環(huán)境中。

貨架有效期驗(yàn)證資料中需要明確滅菌產(chǎn)品的包裝材料、包裝工藝及方法、加速老化試驗(yàn)或/和實(shí)時(shí)老化試驗(yàn)報(bào)告。加速老化試驗(yàn)中需明確試驗(yàn)溫度、濕度、加速老化時(shí)間的確定依據(jù)，論證阿列紐斯方程中各項(xiàng)參數(shù)對凝膠組分的適用性，否則宜提供產(chǎn)品實(shí)時(shí)老化試驗(yàn)報(bào)告。若申請人提供其他醫(yī)療器械產(chǎn)品的貨架有效期驗(yàn)證資料，則需提供其與本次申報(bào)產(chǎn)品在原材料、滅菌方法、滅菌劑量、包裝材料、包裝工藝、包裝方式及其它影響阻菌性能的因素方面具有等同性的證明資料。不同包裝、不同滅菌方式的產(chǎn)品需分別提供驗(yàn)證資料。

貨架有效期的確定需建立在科學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，如穩(wěn)定性試驗(yàn)，其目的是考察產(chǎn)品在溫度、濕度、光線、重力的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，為產(chǎn)品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)通過試驗(yàn)建立產(chǎn)品的有效期。因此，申請人在申報(bào)產(chǎn)品注冊時(shí)，需對包裝完整性和包裝強(qiáng)度進(jìn)行評價(jià)試驗(yàn)，如染色液穿透試驗(yàn)、氣泡試驗(yàn)、材料密封強(qiáng)度試驗(yàn)、模擬運(yùn)輸?shù)?，同時(shí)需結(jié)合產(chǎn)品性能指標(biāo)要求，提供產(chǎn)品有效期的驗(yàn)證報(bào)告及內(nèi)包裝材料信息。

申請人需提交運(yùn)輸穩(wěn)定性驗(yàn)證資料，可依據(jù)有關(guān)適用的國內(nèi)、國際標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證方案進(jìn)行，如：產(chǎn)品包裝的跌落試驗(yàn)、振蕩試驗(yàn)等，提交運(yùn)輸穩(wěn)定性驗(yàn)證資料，證明在規(guī)定的運(yùn)輸條件下，運(yùn)輸過程中環(huán)境條件（包括氣壓、溫度、濕度等變化）不會對產(chǎn)品的特性和性能造成不利影響。

（四）臨床評價(jià)資料

注冊申請人需在滿足注冊法規(guī)要求的前提下，按照《醫(yī)療器械臨床評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求選擇合適的臨床評價(jià)路徑提交臨床評價(jià)資料。

本指導(dǎo)原則涉及的I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品為高風(fēng)險(xiǎn)器械，基于目前的審評經(jīng)驗(yàn)，除《決策是否開展醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》第三部分第（一）款中可考慮免于開展臨床試驗(yàn)的情形，原則上此類產(chǎn)品需要開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)需按照《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》開展，并提交完整的臨床試驗(yàn)資料。臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)可參考《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)指導(dǎo)原則》，需要考慮產(chǎn)品的固定方式以及材料脫落風(fēng)險(xiǎn)。如有輔助固定的方式或聯(lián)合使用其他產(chǎn)品（如生物膠、縫合線、固定釘?shù)龋┣樾?，?yīng)評估輔助固定產(chǎn)品包括其降解特性和產(chǎn)物，對植入部位及修復(fù)效果的影響。

申請人如有境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)，可參照《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求提交相關(guān)資料。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

1.產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽需符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》和YY/T 0466.1《醫(yī)療器械用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號第1部分：通用要求》中的相關(guān)要求。

2.說明書需告知使用者所有使用過程中相關(guān)的剩余風(fēng)險(xiǎn)。對產(chǎn)品預(yù)期使用者的技術(shù)知識、經(jīng)驗(yàn)、教育背景、培訓(xùn)、身體狀況以及產(chǎn)品使用環(huán)境（含工作條件）有要求的，在說明書中需予以明確。

3.當(dāng)產(chǎn)品在臨床使用時(shí)需與其他產(chǎn)品配合，應(yīng)在說明書予以明確，研究資料中需有可配合使用的支持性資料。說明書中需提示，不應(yīng)過度注射或植入材料，以避免在損傷部位產(chǎn)生張力。對于固定形狀材料，說明書中需說明手術(shù)時(shí)是否可以進(jìn)行切割修整。

（六）質(zhì)量管理體系文件

按照《關(guān)于公布醫(yī)療器械注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》提交相關(guān)文件。

三、參考文獻(xiàn)

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[8] 國家食品藥品監(jiān)督管理局. 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)和審查指南:關(guān)于印發(fā)醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)和審查指南的通知2007年第345號[Z].

[9] 國家藥監(jiān)局器審中心.無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則（2022年修訂版）：國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則（2022年修訂版）的通告2022年第12號[Z].

[10] 國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則第一部分：決策原則（2021年修訂版）: 國家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則（2021年修訂版）等2項(xiàng)注冊審查指導(dǎo)原則的通告2021年第75號[Z].

[11] 國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施質(zhì)量保證: 國家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則（2021年修訂版）等2項(xiàng)注冊審查指導(dǎo)原則的通告2021年第75號[Z].

[12] 國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械臨床評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械臨床評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則等5項(xiàng)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告2021年第73號 [Z].

[13] 國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則: 國家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告2022年第8號[Z].

[14] 中華人民共和國藥典（2020版）[Z].

[15] U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Biologics Evaluation and Research Center for Devices and Radiological Health. Preparation of IDEs and INDs for Products Intended to Repair or ｒｅｐｌａｃｅ Knee Cartilage: Guidance for Industry 2011[Z].

[16] GB/T 16886.1, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評價(jià)與試驗(yàn) [S].

[17] GB/T 16886.3, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn) [S].

[18] GB/T 16886.5, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第5部分：體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)[S].

[19] GB/T 16886.10, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第10部分：刺激與皮膚致敏試驗(yàn)[S].

[20] GB/T 16886.11, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第11部分：全身毒性試驗(yàn)[S].

[21] GB/T 16886.20, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)第20 部分:醫(yī)療器械免疫毒理學(xué)試驗(yàn)原則和方法[S].

[22] GB/T 42062, 醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用[S].

[23] YY/T 0466.1, 醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號第1部分：通用要求[S].

[24] YY/T 1435, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 水凝膠表征指南[S].

[25] YY/T 1453, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 I型膠原蛋白表征方法[S].

[26] YY/T 1636, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 再生膝關(guān)節(jié)軟骨的體內(nèi)磁共振評價(jià)方法[S].

[27] YY/T 0606.10, 組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 第10部分：修復(fù)或再生關(guān)節(jié)軟骨的植入物體內(nèi)評價(jià)指南[S].

[28] YY/T 1562, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 生物材料支架 細(xì)胞活性試驗(yàn)指南[S].

[29] YY/T 1810, 組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 用以評價(jià)軟骨形成的硫酸糖胺聚糖(sGAG)的定量檢測[S].

[30] YY/T 1805.2, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 膠原蛋白 第2部分 I型膠原蛋白分子量檢測十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法[S].

[31] YY/T 1576, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 可吸收生物材料植入試驗(yàn)[S].

[32] YY/T 1561, 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 動物源性支架材料殘留α-Gal抗原檢測[S].

[33] YY/T 1876, 組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 動物源性生物材料DNA殘留量測定法：熒光染色法[S].

[34] YY/T 0954 無源外科植入物 Ⅰ型膠原蛋白植入劑[S].

[35] ISO 13019, Tissue-engineered medical products---- Quantification of sulfated glycosaminoglycans (sGAG) for evaluation of chondrogenesis[S].

[36] ASTM F2212, Standard Guide for Characterization of Type I Collagen as Starting Material for Surgical Implants and Substrates for Tissue Engineered Medical Products(TEMPs) [S].

附錄

I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品動物試驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵內(nèi)容

I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品動物試驗(yàn)方案中，宜至少明確如下方面的試驗(yàn)設(shè)計(jì)信息：

一、植入周期

在小型動物（兔）模型，植入6～8周可以提供植入物存留、修復(fù)類型等方面的信息；在大型動物模型中，8～12周的研究周期可以提供生物相容性、早期細(xì)胞反應(yīng)以及缺損內(nèi)植入物存留等方面的信息，如果要基于形態(tài)學(xué)和組織生物化學(xué)的基礎(chǔ)行判斷關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)或再生程度，通常需要8～12個(gè)月的周期。

二、缺損部位

人體透明關(guān)節(jié)軟骨損傷常發(fā)生在膝關(guān)節(jié)，因此宜在動物模型中使用膝關(guān)節(jié)評價(jià)軟骨修復(fù)。股骨髁、滑車溝和脛骨平臺，以及同一關(guān)節(jié)面不同解剖部位的受力狀態(tài)和強(qiáng)度顯著不同，滑車溝可作為承受不同于股骨髁的載荷和剪切力的評價(jià)部位。

三、缺損大小

通過使用合適的器械，移除軟骨和骨組織，而不過多損傷周圍組織，形成軟骨（全層或部位厚度）或骨軟骨（全層和跨骨的）缺損。在一個(gè)關(guān)節(jié)表面可形成多個(gè)缺損以評價(jià)一個(gè)以上的植入物，然而應(yīng)考慮多個(gè)缺損的大小和位置，以及對周圍組織的影響。對每種動物而言，臨界大小的缺損定義為動物不經(jīng)干預(yù)能修復(fù)的最大尺寸（直徑）缺損，每種動物的臨界缺損大小通常不同。一般情況下，I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品動物試驗(yàn)中，缺損模型宜不小于該動物的臨界缺損，但也不應(yīng)超過關(guān)節(jié)面積的15%～20%，或髁寬度的50%～60%。

四、對照組設(shè)置

動物試驗(yàn)宜包括陰性對照（空白缺損）和/或其他對照。在有已獲批準(zhǔn)的I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品時(shí)，動物試驗(yàn)宜包括上市產(chǎn)品對照組。更多的動物試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)可以參考YY/T 0606.10《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 第10部分：修復(fù)或再生關(guān)節(jié)軟骨植入物的體內(nèi)評價(jià)指南》。

五、評價(jià)指標(biāo)

（一）大體觀察

定期觀察手術(shù)切口的紅腫、有無分泌物、切口有無裂開、愈合情況、動物術(shù)側(cè)關(guān)節(jié)活動情況。損傷部位修復(fù)大體情況，包括顏色、質(zhì)地、表面光滑度、修復(fù)厚度、與周圍軟骨的整合情況、關(guān)節(jié)滑膜是否有增生等指標(biāo)。

（二）影像學(xué)檢查

如有需要可考慮參考YY/T 1636 《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品再生膝關(guān)節(jié)軟骨的體內(nèi)磁共振評價(jià)方法》，通過影像學(xué)檢查軟骨及軟骨下骨的修復(fù)再生情況。MRI無創(chuàng)性檢查可用于體內(nèi)軟骨修復(fù)進(jìn)度的監(jiān)測，特別在中期觀察點(diǎn)。

（三）組織學(xué)切片

術(shù)后需設(shè)置不同的取材點(diǎn)，每個(gè)取材點(diǎn)試驗(yàn)組及對照組各取材至少6個(gè)樣本，取出術(shù)側(cè)關(guān)節(jié)，組織學(xué)切片染色進(jìn)行新生軟骨的定性及定量的檢測，以及軟骨下骨的修復(fù)再生情況。

（四）修復(fù)效果評分

采用國際軟骨修復(fù)協(xié)會（ICRS）評估標(biāo)準(zhǔn)或改良的Wakitani評分法，按指標(biāo)觀察修復(fù)組織大體情況、基質(zhì)染色、修復(fù)面積、軟骨厚度及與正常組織的整合情況。分別計(jì)算試驗(yàn)組及對照組所有實(shí)驗(yàn)動物評分均值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

（五）免疫組化

觀察點(diǎn)取材時(shí)可進(jìn)行Ⅱ型、I型和X型膠原及蛋白聚糖的免疫組化染色，觀察軟骨再生情況，同時(shí)結(jié)合組織形態(tài)學(xué)結(jié)果，評價(jià)再生軟骨組織肥大化和纖維化的情況。

（六）力學(xué)檢測

觀察點(diǎn)取材時(shí)進(jìn)行聚集模量、動態(tài)剛度、泊松比、滲透性與摩擦系數(shù)等力學(xué)檢測。

（七）糖胺聚糖 （GAG）含量檢測

將力學(xué)測定的樣品回收，取其修復(fù)區(qū)域軟骨組織進(jìn)行GAG含量檢測，GAG含量檢測參照YY/T 1810 《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 用以評價(jià)軟骨形成的硫酸糖胺聚糖(sGAG)的定量檢測》。

（八）免疫學(xué)指標(biāo)

選擇適當(dāng)?shù)挠^察點(diǎn)進(jìn)行局部組織的免疫學(xué)檢查，以及血生化的全身免疫學(xué)檢查。

（九）安全性指標(biāo)

動物試驗(yàn)研究中，建議對相關(guān)的不良事件進(jìn)行觀察。