附件：軟組織再生型疝修補補片動物試驗研究技術(shù)審評要點（2025年第26號）.doc

軟組織再生型疝修補補片動物試驗研究
技術(shù)審評要點

本要點旨在指導注冊申請人對軟組織再生型疝修補補片（以下簡稱為“再生型疝補片”）進行動物試驗設計及注冊資料準備，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的審評提供技術(shù)參考。

申請人需參照《醫(yī)療器械動物試驗研究注冊審查指導原則第二部分：試驗設計、實施質(zhì)量保證》開展研究方案設計、實施質(zhì)量保證相關(guān)工作。本要點是對再生型疝補片動物試驗的一般要求，注冊申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本要點是供注冊申請人和技術(shù)審評人員參考使用的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強制執(zhí)行，需在遵循相關(guān)法規(guī)和強制性標準的前提下使用本要點。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。

本要點是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本要點相關(guān)內(nèi)容也將進行適時調(diào)整。

一、適用范圍

疝修補補片從修復機理考慮可劃分為兩種類型，第一種是不可吸收疝補片及瘢痕組織共同作用對缺損的軟組織進行修復，第二種是可吸收疝補片植入后形成重塑及再生的天然宿主組織對缺損的軟組織進行修復，本要點適用于后者。在該類產(chǎn)品進行臨床研究前，一方面需要開展動物試驗以保護臨床受試者的權(quán)益，另一方面考慮到臨床試驗中很難直接觀察到補片在人體內(nèi)的降解吸收及組織再生情況，所以必須開展相關(guān)動物試驗，對再生型疝補片的降解吸收情況及對缺損軟組織的再生修復情況進行評價，以控制器械疝復發(fā)等相關(guān)并發(fā)癥的風險。

本要點是對軟組織再生型疝補片動物試驗的基本要求，重點關(guān)注再生功效等方面。對于采用新材料、新設計的疝補片，注冊申請人宜根據(jù)產(chǎn)品特性及試驗目的開展更深入的動物試驗研究。另外需注意，當注冊申請人考慮同時對產(chǎn)品可行性、安全性、其他有效性等進行綜合性評價時，例如對疝補片皺縮情況、移位情況、生物相容性等項目進行評價，動物試驗設計要素可能會與本要點存在差異。

二、動物試驗設計的考慮因素

（一）動物種類及模型建立

選擇適用的實驗用動物進行疝補片再生功效情況的動物試驗研究。注冊申請人需對動物試驗中所采用動物的適用性進行分析，提供動物種類選擇及模型建立的確定依據(jù)，如參考文獻或前期探索性動物試驗資料等。

若產(chǎn)品涉及未在境內(nèi)外市售再生型疝補片中使用過的新材料、新設計，可先視情況選擇某種成年小型動物（如大鼠等）進行可行性動物試驗研究。

對于疝及腹壁缺損修復有效性的評價應建立疝缺損動物模型?？紤]到實驗用動物與人體在腹壁解剖結(jié)構(gòu)、疝缺損程度等方面的可比性，建議選擇一定數(shù)量的某種成年大型動物（如豬等）進行動物試驗研究。報告中詳細描述實驗用動物的來源、背景、規(guī)格、微生物與寄生蟲控制級別等。

可參考以下方法進行造模和修補。

實驗用動物常規(guī)麻醉后，褪去腹部毛發(fā)，切開皮膚及皮下組織，大型動物雙側(cè)乳頭線外側(cè)約3cm切開皮下組織，長度15cm，切除腹壁肌肉及筋膜全層，保留皮膚、皮下組織及腹膜，一般可得3cm×5cm缺損。小型動物考慮1.5cm×1.5cm（或2cm×2cm）缺損。

缺損造模后直接用補片進行修補。補片覆蓋范圍至少超過缺損邊緣3cm。根據(jù)受試樣品預期臨床使用方法進行修補操作，補片放置于腹膜外，不關(guān)閉缺損，將補片與缺損周邊正常軟組織進行固定，將補片邊緣進行固定?？梢允褂貌豢晌湛p線進行縫合，以便對修復區(qū)域進行標記。必要時，在腹膜上打孔制作內(nèi)引流。將補片以疝環(huán)缺損為中心完全覆蓋缺損，確保補片鋪平且完全貼合腹壁。間斷縫合固定補片，在低張力狀態(tài)下覆蓋腹壁缺損。縫合皮下筋膜和皮膚切口。

術(shù)后1周內(nèi)每日肌肉注射抗生素消炎，皮膚縫合處每日以碘伏消毒。

（二）對照的選擇

宜選擇材質(zhì)、結(jié)構(gòu)、生產(chǎn)工藝、適用范圍等方面最相似的軟組織再生型疝補片產(chǎn)品作為動物試驗的對照器械，詳細描述對照器械的產(chǎn)品名稱、規(guī)格/型號、批號、數(shù)量、臨床適應證?？紤]隨機化的設計并予以描述。在開展新生組織的機械性能研究時，除與市售產(chǎn)品對照組進行各隨訪時間點的比較外，建議在末期隨訪時與自然腹壁的機械性能進行比較。

一般采用單只動物僅植入申報產(chǎn)品或?qū)φ债a(chǎn)品的設計。若動物試驗僅評價疝補片與組織的局部作用及反應，且動物大小允許，可在腹壁兩側(cè)缺損位置分別植入實驗組及對照組補片。

（三）評價指標的選擇

1．一般項目觀察評價

于術(shù)前、術(shù)后7天內(nèi)每天測量并記錄動物體溫，確認有無異常。如有異常，應持續(xù)觀察至體溫恢復正常。觀察所有動物的活動與進食情況。每周記錄體重變化。

于術(shù)后7天內(nèi)每天觀察術(shù)后切口愈合情況，確定切口愈合等級并記錄，由未參與實驗的專業(yè)人員參照YY/T 1754.3-2023判定切口清潔程度和愈合等級并記錄，見表1。如有異常，應持續(xù)觀察記錄。

于術(shù)前、術(shù)后2周、處死時取血并收集血樣，檢測血常規(guī)（紅細胞計數(shù)，白細胞計數(shù)，血紅蛋白，中性粒細胞計數(shù)，淋巴細胞計數(shù)，血小板計數(shù)）、凝血（ACT、纖維蛋白原）、血生化（總蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、GGT、膽紅素、肌酐、尿素氮，通過血生化分析可評價產(chǎn)品的安全性，可根據(jù)動物試驗目的及設計來選擇合適的指標進行檢測）。如有異常，進一步分析原因。

2.腹壁缺損修復區(qū)域的大體評價

（1）疝發(fā)生情況

術(shù)后各處死時間點（包括補片完全降解的終點），直視觀察確認修復區(qū)有無疝發(fā)生（直視以觀察到明顯疝環(huán)或腹部體表明顯凸起、凸起高度超過1cm確認疝發(fā)生），必要時通過影像學觀察確認腹腔內(nèi)容物脫出情況。若發(fā)現(xiàn)疝發(fā)生，應確認疝發(fā)生因素為手術(shù)因素（補片固定脫離）或補片因素（補片降解后無再生組織），并進行記錄。

（2）補片及修復區(qū)狀態(tài)的觀察

處死動物并剖檢，剝離腹膜和腹膜下脂肪組織，進行下列指標的檢查：

補片修復部位感染、補片降解情況。

補片狀態(tài)：觀察并記錄血清腫/血腫、補片位移、固定脫落、折疊、皺縮等。

完整取下各組補片的修復區(qū)及周圍5mm組織。測量重塑及再生組織面積和厚度：缺損區(qū)域內(nèi)選擇10個點測量其厚度，記錄數(shù)值并計算平均值，并與對照樣品組進行統(tǒng)計學分析。選擇的測試點應能代表整個修復區(qū)的修復情況。

3. 組織病理學評價指標

組織病理學對評價組織重塑及再生非常重要?？赏ㄟ^觀察補片植入后的炎癥反應、新生膠原排列形態(tài)、補片降解吸收等情況進行評價。

收集完整的修復區(qū)以及至少5 mm相鄰組織，沿組織中線、動物身長方向切開將組織分為兩部分，一部分用于生物力學性能評價，另一部分用于組織病理學評價。用于組織病理學評價的標本沿同一對角線方向切開后取連續(xù)組織塊，將組織塊完整地放入10％中性福爾馬林中。待組織完全固定，常規(guī)方法制作石蠟切片，分別進行組織學染色。

通過HE染色可以觀察修復區(qū)炎性細胞浸潤、組織反應、補片降解、鈣化情況。通過Masson和天狼星紅染色顯示膠原纖維及其分型，從而對修復區(qū)的組織結(jié)構(gòu)和功能評價提供支持。

按表2和表3記錄重塑及再生組織區(qū)炎癥細胞類型/反應和組織反應。

按表4進行組織學半定量評價。分別計算試驗樣品組及對照樣品組的各項記分之和，除以樣本總量，得到記分平均值。以試驗樣品組平均值減去對照樣品組平均值進行修復組織區(qū)炎癥反應的比較（負值記錄為零）。

按表5進行組織重塑再生評價。分別計算試驗樣品組及對照樣品組的各項記分，除以樣本總量，得到記分平均值。以試驗樣品組平均值減去對照樣品組平均值進行組織重塑再生效果比較（負值記錄為零）。

4. 生物力學性能

生物力學性能對于評價疝補片的再生修復療效十分重要。在再生型疝補片植入后，材料與新生組織的結(jié)合體共同發(fā)揮對缺損組織進行修復的作用，需要在不同時間點完整地取下修復區(qū)域疝補片材料與再生組織結(jié)合體，進行如拉伸強度或頂破強度等生物力學性能的測試。

注冊申請人需繪制軟組織再生型疝補片生物力學性能與植入時間相關(guān)的擬合曲線，對比該曲線最低值與該生物力學性能臨床可接受標準的大小，評價補片降解與組織再生速率的匹配性。理想的軟組織再生型疝補片應在植入后直至完全降解、再生修復完成的整個過程中均保持足夠的生物力學性能。

（1）頂破強度：盡可能大地取出樣品，取出的組織試樣離體后，保持組織濕潤并立即檢測，如樣品太干，復水后檢測。測試方法參見YY/T 0500中探頭破裂強度法，對結(jié)果進行分析。

（2）拉伸強度：取出的組織試樣離體后，保持組織濕潤并立即檢測，如樣品太干，復水后檢測。若豬作為實驗用動物，分別裁剪寬度不小于10mm，長度不小于50 mm組織試樣各3塊（若不能滿足上述尺寸，盡可能裁剪出規(guī)則形狀的條狀樣品），記錄組織試樣厚度、寬度。將試樣兩端固定于萬能拉力試驗機夾具，兩夾具間距約20 mm，按照100 mm/min的速度穩(wěn)定拉伸，直至組織試樣斷裂，記錄單位寬度的最大拉伸力與位移，對結(jié)果進行分析。

注：樣品制備過程中，若補片各向異性，未完全降解且易于觀察的情況下，應按照樣品的不同方向取樣；無法按照不同方向取樣的，應論證取樣方向的合理性。

如樣品數(shù)量限制無法完成兩項生物力學試驗，優(yōu)先測量樣品的頂破強度。

5. 免疫組化分析：

免疫組化分析對再生型疝補片的再生修復功效評價也有一定的參考價值。根據(jù)檢測目的可大致分為炎癥反應因子（如TNF-A、TGF-β1、IL-4）、血管生成相關(guān)因子（如VEGF、CD31）、肌細胞生成相關(guān)因子（如肌球蛋白、肌細胞生成素）、巨噬細胞分型（M1及M2）、膠原蛋白（Ⅰ型、Ⅲ型）、細胞外基質(zhì)沉積。免疫組化檢測應該與組織病理學結(jié)果聯(lián)合進行分析，目前尚未形成統(tǒng)一的評分標準，可根據(jù)動物試驗目的來選擇合適的指標進行檢測。

6．不良事件

對安全性事件或異常進行記錄和分析，如發(fā)生感染、漿液腫（積液、血清腫）、臟器侵蝕、出血、死亡等，應詳細分析死亡原因，分析與受試樣品的相關(guān)性。

（四）觀察時間點的選擇

一般情況下，需結(jié)合再生型疝補片的降解特性、動物種類、評價指標等因素綜合確定術(shù)后解剖及觀察時間點，應涵蓋補片降解的早期（微量降解）、中期（實質(zhì)性材料結(jié)構(gòu)變化）、末期（完全降解）時間點。應采用連續(xù)觀察的方式，對于大鼠等小型動物，一般觀察到產(chǎn)品預期完全降解的時間，如12周內(nèi)完全降解，可以在第1、2、4、8、12周處死；對于豬等大動物，也應觀察到產(chǎn)品預期完全降解的時間，如24周內(nèi)完全降解，在術(shù)后4、12、24周等適宜的時間點處死，根據(jù)植入材料的數(shù)量及研究設計取材。對于新材料制備的再生型疝補片，建議增加完全降解后4周的觀察時間點。

（五）樣本量及結(jié)果分析

1．樣本量

一般情況下，動物試驗樣本量需結(jié)合再生型疝補片的降解特性、試驗設計類型、評價指標、評價方法的準確性、試驗器械及對照器械的情況、實驗用動物的變異性、外科手術(shù)操作的一致性、試驗中動物的預期損耗率、分析數(shù)據(jù)所用的統(tǒng)計學方法等因素來綜合確定，并需有統(tǒng)計學考慮?？蓪F(xiàn)有的試驗數(shù)據(jù)作為確定樣本量的參考，包括文獻報道的動物試驗或申報產(chǎn)品的預試驗情況。注冊申請人應在注冊資料中提交動物試驗樣本量的確定依據(jù)。

2．結(jié)果分析

定量指標的統(tǒng)計描述將計算均值、標準差、中位數(shù)、最小值、最大值，下四分位數(shù)（Q1），上四分位數(shù)（Q3）；分類指標的統(tǒng)計描述各類的例數(shù)、發(fā)生率及構(gòu)成比。

根據(jù)分組設計及指標類型采用適當?shù)姆椒ㄟM行分析，定量資料的組間比較采用成組t檢驗或Wilcoxon秩和檢驗，分類數(shù)據(jù)采用卡方檢驗或精確概率法；等級資料采用Wilcoxon秩和檢驗。

動物試驗結(jié)論需包括統(tǒng)計學分析與生物學數(shù)據(jù)分析的綜合評價結(jié)果。

三、其他應注意的問題

為保證動物試驗結(jié)果真實、可靠，應使用質(zhì)量合格的實驗動物或檢疫合格的實驗用動物。注冊申請人需與動物試驗實施單位簽訂合同并共同設計、制訂動物試驗方案，上述資料作為產(chǎn)品質(zhì)量體系管理文件存檔。注冊時提交注冊申請人與動物試驗實施單位共同確認并簽章的動物試驗報告。

為保證動物試驗的研究質(zhì)量，應盡量避免不同術(shù)者手術(shù)操作差異、動物麻醉死亡、手術(shù)死亡、術(shù)后感染及其他意外情況對產(chǎn)品評價產(chǎn)生影響。建議注冊申請人邀請有經(jīng)驗的經(jīng)過培訓的專業(yè)人員進行評價。注冊申請人需保存詳細的試驗情況記錄及分析資料，包括以下適用的內(nèi)容：所有受試品及對照品信息、動物飼養(yǎng)記錄、鎮(zhèn)痛麻醉記錄、手術(shù)過程記錄、原始病理照片、手術(shù)切片、手術(shù)錄像等實驗原始資料、對動物麻醉死亡等非預期事件的有關(guān)證據(jù)及分析資料等。為了保證數(shù)據(jù)的溯源性，上述資料需作為產(chǎn)品質(zhì)量管理體系文件存檔。

四、參考文獻

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