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金標(biāo)類檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
（食藥監(jiān)辦械函[2013]3號）

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對金標(biāo)類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對金標(biāo)類檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于第三類體外診斷試劑中金標(biāo)類試劑的注冊技術(shù)審查，其他類金標(biāo)試劑可作參考。

三、基本要求

（一）基本原則

1.診斷試劑的研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2.診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

4.研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質(zhì)量控制

1.主要生物原料

與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標(biāo)記、包被硝酸纖維膜及用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：

（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜的聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測。

（4）效價(jià)

效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（5）功能性實(shí)驗(yàn)

功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求并檢驗(yàn)合格，達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可用于生產(chǎn)。

建議對牛血清白蛋白作以下檢驗(yàn)：

外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其他雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時(shí)間在18~26℃時(shí)應(yīng)不大于15分鐘，pH值應(yīng)為6.5~7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，其標(biāo)準(zhǔn)為大于等于95%。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。

3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級別進(jìn)行檢驗(yàn)。主要的檢測指標(biāo)包括：外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)取?/p>

主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.其他物料

硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙、玻璃纖維膜等在購入時(shí)，其生產(chǎn)商必須提供該批次材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（1）硝酸纖維素膜

硝酸纖維素膜應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求，毛細(xì)遷移速度，韌性（切割時(shí)膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細(xì)遷移速度偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（2）玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙

玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(yīng)具有厚度、毛細(xì)遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細(xì)遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（3）玻璃纖維膜

適用于全血檢測的金標(biāo)試劑，過濾紅細(xì)胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求。

（4）塑料襯片

塑料襯片應(yīng)具有厚度、硬度（切割時(shí)一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標(biāo)識(shí)吻合）、粘性（切割時(shí)造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。

（5）其他

粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

（三）試劑盒的制備

本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標(biāo)記抗原或抗體的制備，膠體金標(biāo)記的包被，檢測線及質(zhì)控線的制備，膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。

1.膠體金標(biāo)記物的制備

采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應(yīng)符合規(guī)定，膠體金標(biāo)記物在510~560nm波長處應(yīng)有最大吸收值，置2~8℃保存，應(yīng)在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。采用合適的方法確定膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標(biāo)記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。

2.檢測線及質(zhì)控線的制備

取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應(yīng)用同樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗(yàn)證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質(zhì)控線應(yīng)具有間隔距離要求，應(yīng)對所用的金標(biāo)用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進(jìn)行質(zhì)量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號、數(shù)目、標(biāo)識(shí)，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。

3.貼膜、切割、裝袋

貼膜、切割及裝袋應(yīng)在具有相應(yīng)濕度（通過驗(yàn)證方法確定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應(yīng)有寬度要求。

（四）質(zhì)量控制

用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、精密度等指標(biāo)，如具有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

1.半成品質(zhì)量控制

（1）半成品抽樣

檢驗(yàn)人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號標(biāo)記，待檢。

（2）半成品檢驗(yàn)

對所抽樣的半成品做陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究，并制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在在特定溫度或特定條件下完成。

2.成品質(zhì)量控制

每一批金標(biāo)類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測及注冊檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。

一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）對成品進(jìn)行檢驗(yàn)，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（1）物理檢查

應(yīng)進(jìn)行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（2）性能方面的檢測

陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

每批試劑批放行前，應(yīng)完成穩(wěn)定性試驗(yàn)，并達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在特定溫度或特定條件下完成。

四、名詞解釋

金標(biāo)類檢測試劑：利用膠體金免疫技術(shù)，采用膠體金標(biāo)記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關(guān)抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應(yīng)用層析法的原理檢測樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社