國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布PD-L1檢測試劑臨床試驗—結(jié)果重現(xiàn)性研究注冊審查指導(dǎo)原則的通告（2022年第27號）

發(fā)布時間：2022-06-27

為進一步規(guī)范PD-L1檢測試劑的管理，國家藥監(jiān)局器審中心組織制定了《PD-L1檢測試劑臨床試驗—結(jié)果重現(xiàn)性研究注冊審查指導(dǎo)原則》，現(xiàn)予發(fā)布。

特此通告。

附件：PD-L1檢測試劑臨床試驗—結(jié)果重現(xiàn)性研究注冊審查指導(dǎo)原則.doc

國家藥品監(jiān)督管理局
醫(yī)療器械技術(shù)審評中心
2022年6月27日

附件

PD-L1檢測試劑臨床試驗—結(jié)果重現(xiàn)性研究注冊審查指導(dǎo)原則

一、前言

近年來，以程序性細胞死亡蛋白1 （Programmed cell death protein 1, PD-1）/程序性死亡配體1 （Programmed death-ligand 1, PD-L1）免疫檢查點抑制劑為主的免疫治療在多個惡性腫瘤中取得了突破性進展，一系列抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床。PD-L1檢測試劑是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫治療適宜人群篩選和療效預(yù)測的生物標志物。免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC，簡稱“免疫組化”）檢測是評估腫瘤組織PD-L1表達狀態(tài)的一種有效且常用的方法，廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤中，以識別或輔助預(yù)測可能從免疫治療中獲益的患者。

基于免疫組化法的PD-L1檢測試劑操作程序和結(jié)果判讀較為復(fù)雜，該類檢測試劑臨床應(yīng)用的準確性與重復(fù)性是產(chǎn)品重要的臨床性能，本指導(dǎo)原則旨在規(guī)范產(chǎn)品檢測結(jié)果重現(xiàn)性臨床研究的開展。

本指導(dǎo)原則是針對PD-L1檢測試劑結(jié)果重現(xiàn)性臨床研究的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。該文件為供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本文件相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于基于免疫組化法的PD-L1檢測試劑，該類產(chǎn)品用于定性檢測人中性福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）的腫瘤組織中PD-L1蛋白的表達水平。

三、臨床試驗要求

PD-L1檢測試劑結(jié)果重現(xiàn)性臨床研究包括兩部分內(nèi)容：環(huán)比試驗與閱片一致性研究。臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

（一）臨床試驗設(shè)計

1.環(huán)比試驗（Ring study）

環(huán)比試驗是從病理切片開始，按照試劑說明書進行樣本處理、染色及結(jié)果判讀，評價各臨床試驗機構(gòu)對同一樣本集從染色到結(jié)果判斷的一致性。

環(huán)比試驗應(yīng)選擇至少三家臨床試驗機構(gòu)開展，試驗所需的病例為三家臨床試驗機構(gòu)共同提供的樣本組成的樣本集。在樣本集構(gòu)建過程中，每家臨床試驗機構(gòu)提供的陽性病例、陰性病例及總病例數(shù)應(yīng)相對均衡。每個病例應(yīng)至少提供足夠三次按照申報產(chǎn)品說明書進行檢測的病理切片數(shù)量。

臨床試驗牽頭單位研究者將樣本集中每一病例的病理切片分配至每家臨床試驗機構(gòu)，保證每家臨床試驗機構(gòu)均能夠?qū)υ摬±凑丈陥螽a(chǎn)品說明書進行至少一次染色并報告結(jié)果。因此，每家臨床試驗機構(gòu)均能對樣本集中所有病例的病理切片進行染色及結(jié)果判讀。

各臨床試驗機構(gòu)收到臨床試驗牽頭單位分配的病理切片后，選擇具有一定資歷的研究者，按照申報產(chǎn)品說明書的要求對病理切片進行染色及結(jié)果判讀。針對整個樣本集的染色建議盡快完成。三家臨床試驗機構(gòu)通過對樣本集中病理切片進行染色及判讀，最終各機構(gòu)的數(shù)據(jù)形成環(huán)比試驗的數(shù)據(jù)集，用于后續(xù)統(tǒng)計分析。環(huán)比試驗設(shè)計見圖1。

圖1.環(huán)比試驗設(shè)計示意圖

2.閱片一致性研究

閱片一致性研究的對象為經(jīng)申報產(chǎn)品按照產(chǎn)品說明書進行染色的病理切片，各臨床試驗機構(gòu)研究者根據(jù)產(chǎn)品說明書中結(jié)果判讀方法對切片進行判讀，評價不同研究者對染色切片判讀結(jié)果的一致性。

閱片一致性研究應(yīng)選擇至少三家臨床試驗機構(gòu)，研究內(nèi)容包括：機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究、機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性研究、不同機構(gòu)間病理醫(yī)師閱片一致性研究。各臨床試驗機構(gòu)可根據(jù)臨床試驗內(nèi)容，在科學(xué)設(shè)計的前提下將上述閱片一致性研究合并進行，但應(yīng)在臨床試驗方案中明確各機構(gòu)不同研究者參與的具體研究內(nèi)容，臨床試驗應(yīng)嚴格按照臨床試驗方案進行。

2.1機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究

機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究應(yīng)在三家臨床試驗機構(gòu)開展，每家臨床試驗機構(gòu)針對本機構(gòu)所提供的臨床試驗所需的已完成染色的病理切片進行本研究。用于臨床試驗的病理切片應(yīng)包括判讀結(jié)果為陽性的切片及判讀結(jié)果為陰性的切片。

每家臨床試驗機構(gòu)選擇一名一定資歷的病理醫(yī)師對該機構(gòu)入組的所有病理切片進行3次判讀，每次判讀間隔一定的時間，同一病理醫(yī)師的不同次閱片結(jié)果組成分析數(shù)據(jù)集。機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性試驗設(shè)計如圖2。

圖2.機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性試驗設(shè)計示意圖

2.2機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性研究

機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性研究應(yīng)在三家臨床試驗機構(gòu)開展。每家臨床試驗機構(gòu)針對本機構(gòu)所提供的臨床試驗所需的已完成染色的病理切片進行本研究。用于臨床試驗的病理切片應(yīng)包括判讀結(jié)果為陽性的切片及判讀結(jié)果為陰性的切片。

每家臨床試驗機構(gòu)選擇3名不同資歷的病理醫(yī)師參與臨床試驗，臨床試驗過程中由每名病理醫(yī)師對該機構(gòu)入組的所有病理切片進行判讀，所有病理醫(yī)師的閱片結(jié)果組成分析數(shù)據(jù)集。機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性試驗設(shè)計如圖3。

圖3.機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性試驗設(shè)計示意圖

2.3不同機構(gòu)間病理醫(yī)師閱片一致性

不同機構(gòu)間病理醫(yī)師閱片一致性研究應(yīng)在三家臨床試驗機構(gòu)開展。臨床試驗所需病理切片為三家臨床試驗機構(gòu)共同提供的切片組成的切片集，在切片集構(gòu)建過程中，每家臨床試驗機構(gòu)提供的陽性切片、陰性切片及總切片數(shù)應(yīng)相對均衡。每張病理切片應(yīng)為按照申報產(chǎn)品說明書進行染色的病理切片。

各臨床試驗機構(gòu)根據(jù)臨床試驗進展開展切片集的閱片，建議每家臨床試驗機構(gòu)完成全部閱片后，再將切片集轉(zhuǎn)運至下一家機構(gòu)。保證每家臨床試驗機構(gòu)研究者均能對切片集中所有病例的病理切片根據(jù)產(chǎn)品說明書要求進行結(jié)果判讀。

各臨床試驗機構(gòu)收到切片集后，選擇具有一定資歷的研究者，按照申報產(chǎn)品說明書的要求對病理切片進行結(jié)果判讀。三家臨床試驗機構(gòu)對切片集中所有病理切片判讀，最終各結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)形成閱片一致性研究的數(shù)據(jù)集，用于后續(xù)統(tǒng)計分析。不同機構(gòu)間病理醫(yī)師閱片一致性試驗設(shè)計如圖4。

圖4.不同機構(gòu)間病理醫(yī)師閱片一致性試驗設(shè)計示意圖

（二）受試者選擇及樣本收集

環(huán)比試驗與閱片一致性研究入組的受試者應(yīng)為產(chǎn)品預(yù)期適用人群，如待評價產(chǎn)品PD-L1檢測試劑盒預(yù)期用途為定性檢測中性福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）的食管鱗狀細胞癌（ESCC）組織中的PD-L1蛋白表達，則入組病例應(yīng)為臨床明確診斷為食管鱗狀細胞癌的病例。

為了更加科學(xué)的評價產(chǎn)品性能，各部分研究均應(yīng)包含部分PD-L1表達陽性閾值臨近范圍內(nèi)病例（用于指導(dǎo)抗腫瘤藥物使用的閾值），該部分病例所占比例應(yīng)不少于陽性病例的30%。

（三）機構(gòu)和人員

臨床試驗機構(gòu)應(yīng)獲得國家藥品監(jiān)督管理局備案認可。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有嚴格的質(zhì)量管理體系，執(zhí)行實驗室內(nèi)部日常質(zhì)量控制。

臨床試驗中應(yīng)根據(jù)試驗設(shè)計設(shè)定不同資歷的病理醫(yī)師參與試驗，病理醫(yī)師資歷劃分應(yīng)合理。

（四）樣本量估算

臨床試驗應(yīng)進行科學(xué)的樣本量估算，建議采用參數(shù)估計的方法估算樣本量，樣本量估算過程建議設(shè)定合理置信水平和允許誤差。可采用如下公式：

公式中n為樣本量，Z1-α/2為置信度標準正態(tài)分布的分位數(shù)，P為評價指標預(yù)期值，Δ為P的允許誤差大小。

如研究者采用其他的合理的樣本量估算模型，在進行合理解釋的前提下亦可采用。

1.環(huán)比試驗

各機構(gòu)檢測結(jié)果的陽性符合率應(yīng)不低于85%，陰性符合率應(yīng)不低于85%，置信水平取0.05。研究者應(yīng)設(shè)定合理的Δ值，據(jù)此估算環(huán)比試驗所有成對比較結(jié)果中陽性病例數(shù)及陰性病例數(shù)。在保證合理的允許誤差的前提下，臨床試驗中，環(huán)比試驗樣本集中樣本例數(shù)不應(yīng)低于60例，其中陽性不應(yīng)低于30例，陰性病例不低于30。環(huán)比試驗樣本集構(gòu)建過程中，提供的陽性樣本及陰性樣本應(yīng)盡量均衡。

2.閱片一致性研究

2.1機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究、不同病理醫(yī)師閱片一致性研究

該部分研究應(yīng)以每個臨床試驗機構(gòu)為單位，進行樣本量估算。樣本量估算過程中應(yīng)選定合理的主要評價指標，如基于與參考結(jié)果的一致性評價或成對結(jié)果的一致性評價。各機構(gòu)可以采用同一病理醫(yī)師多次閱片匯總統(tǒng)計或不同病理醫(yī)師匯總統(tǒng)計的陽性一致率（或平均陽性一致率）、陰性一致率（或平均陰性一致率）進行陽性及陰性病例的估算，最終入組的病例應(yīng)為估算病例的1/3。樣本量估算過程應(yīng)相關(guān)參數(shù)的設(shè)定應(yīng)科學(xué)、合理，該部分研究臨床性能不應(yīng)低于環(huán)比試驗，置信水平取0.05。研究者應(yīng)設(shè)定合理的Δ值，當預(yù)期值更高時還應(yīng)考慮更優(yōu)的精度。

2.2不同機構(gòu)間閱片一致性研究

該部分研究應(yīng)以三家機構(gòu)提供的切片集進行樣本量估算，樣本量估算過程中主要評價指標的選擇應(yīng)為每家臨床試驗機構(gòu)與參考方法或與其他機構(gòu)對比的陽性一致率、陰性一致率。樣本量估算過程中相關(guān)參數(shù)的設(shè)定應(yīng)科學(xué)、合理，該部分研究臨床性能不應(yīng)低于環(huán)比試驗，不應(yīng)高于機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究、不同病理醫(yī)師閱片一致性研究，置信水平取0.05。研究者應(yīng)設(shè)定合理的Δ值，當預(yù)期值更高時還應(yīng)考慮更優(yōu)的精度。據(jù)此估算的樣量應(yīng)為本研究切片集樣本量，切片集由三家臨床試驗機構(gòu)提供，各機構(gòu)提供的陰性及陽性切片的數(shù)量應(yīng)相對均衡。

2.3在科學(xué)合理設(shè)計的前提下，機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究、不同病理醫(yī)師閱片一致性研究及不同機構(gòu)間閱片一致性研究三個研究中切片可重復(fù)使用。重復(fù)使用切片過程中應(yīng)避免同一病理醫(yī)師在短時間內(nèi)對同一張切片多次判讀。

（五）評價指標及統(tǒng)計分析

環(huán)比試驗及閱片一致性研究統(tǒng)計方法為一致性評價，可采用四格表分析的方法。包括與參考結(jié)果的一致性評價及成對結(jié)果的一致性評價。參考結(jié)果一般為同一樣本或同一個染色切片在不同閱片者判讀過程中，出現(xiàn)頻率最多的結(jié)果。與參考結(jié)果對比過程中主要評價考核試劑與參考結(jié)果的陽性一致率（PPA）、陰性一致率（NPA）、總一致率（OA）。成對結(jié)果的一致性評價主要評價研究者兩兩成對比較的結(jié)果，成對一致性評價指標為平均陽性一致率（APA）、平均陰性一致率（ANA）、平均總一致率（OA）。上述統(tǒng)計分析應(yīng)采用合理的方法進行置信區(qū)間的估算。

1.環(huán)比試驗

環(huán)比試驗的統(tǒng)計分析主要為各臨床試驗機構(gòu)間結(jié)果的兩兩成對比較，成對分析包括以下三組：機構(gòu)1與機構(gòu)2、機構(gòu)2與機構(gòu)3、機構(gòu)3與機構(gòu)1。以第一組機構(gòu)1與機構(gòu)2成對分析為例，以機構(gòu)1的結(jié)果為準，以四格表形式統(tǒng)計機構(gòu)2結(jié)果與機構(gòu)1結(jié)果的一致率，包括陽性一致率及陰性一致率。根據(jù)上述方法分析機構(gòu)2與機構(gòu)3、機構(gòu)3與機構(gòu)1的一致率。最終將三組結(jié)果匯總，分析環(huán)比試驗的平均陽性一致率、平均陰性一致率及平均總一致率。

2.閱片一致性研究

閱片一致性研究統(tǒng)計分析包括與參考結(jié)果的一致性評價及成對結(jié)果的一致性評價。

2.1 機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究

與參考結(jié)果的一致性評價，每張病理切片的參考結(jié)果為本機構(gòu)同一位病理醫(yī)師多次閱片結(jié)果中，出現(xiàn)頻率最多的結(jié)果。病理醫(yī)師單次閱片結(jié)果分別與該參考結(jié)果進行比對，評價陽性一致率、陰性一致率及總一致率，三次閱片結(jié)果匯總為該機構(gòu)同一病理醫(yī)師閱片一致性，三家機構(gòu)結(jié)果匯總為所有機構(gòu)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究。

同一病理醫(yī)師成對結(jié)果的一致性評價，評價過程包括三組：第1次閱片與第2次閱片、第2次閱片與第3次閱片、第3次閱片與第1次閱片。以第一組第1次閱片與第2次閱片成對分析為例，以第1次閱片的結(jié)果為準，以四格表形式統(tǒng)計第2次閱片的結(jié)果與第1次閱片結(jié)果的一致率，包括陽性一致率及陰性一致率。根據(jù)上述方法分析第2次閱片與第3次閱片、第3次閱片與第1次閱片的一致率。最終將三組結(jié)果匯總，分析機構(gòu)內(nèi)同一醫(yī)生閱片的平均陽性一致率、平均陰性一致率及平均總一致率。三家機構(gòu)結(jié)果匯總為所有機構(gòu)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究。

2.2機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性研究

與參考結(jié)果的一致性評價，每張病理切片的參考結(jié)果為本機構(gòu)三位病理醫(yī)師閱片結(jié)果中，出現(xiàn)頻率最多的結(jié)果。具體分析方法可參考本節(jié)2.1機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究。

成對結(jié)果的一致性評價，評價過程包括三組：病理醫(yī)師1與病理醫(yī)師2、病理醫(yī)師2與病理醫(yī)師3、病理醫(yī)師3與病理醫(yī)師1。具體分析方法可參考本節(jié)2.1機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究。

2.3機構(gòu)間病理醫(yī)師閱片一致性研究

與參考結(jié)果的一致性評價，每張病理切片的參考結(jié)果為不同機構(gòu)病理醫(yī)師閱片結(jié)果中，出現(xiàn)頻率最多的結(jié)果。具體分析方法可參考本節(jié)2.1機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究。

成對結(jié)果的一致性評價，評價過程包括三組：機構(gòu)1閱片結(jié)果與機構(gòu)2閱片結(jié)果、機構(gòu)2閱片結(jié)果與機構(gòu)3閱片結(jié)果、機構(gòu)3閱片結(jié)果與機構(gòu)1閱片結(jié)果。具體分析方法可參考本節(jié)2.1機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究。

（六）原始數(shù)據(jù)

1.提交病例數(shù)據(jù)匯總表，內(nèi)容應(yīng)至少包括：性別、年齡、病理診斷結(jié)果、研究者判讀結(jié)果等。

2.提交入選樣本染色代表性彩色圖片，并對染色特點包括組織形態(tài)、染色強度和背景染色特點進行簡要評述。

（七）偏倚控制

為了控制臨床試驗的偏倚，各部分研究過程中應(yīng)針對病例/切片應(yīng)進行設(shè)盲，使研究者在試驗過程中不知曉受試者疾病診斷或其他相關(guān)檢測等信息，從而避免引入偏倚。

在進行同一病理醫(yī)師閱片一致性研究過程中，病理醫(yī)師在進行下一次閱片時應(yīng)保留一段時間的記憶清除期（脫敏期），此段時間一般不少于兩周。

同一病理醫(yī)師閱片一致性研究過程中，每次閱片時建議人為納入一定數(shù)量的不同的干擾病例。干擾病例應(yīng)同時具有陽性和陰性病例，將干擾病例混入分析組中，使研究者同時針對分析組中的病例及干擾病例進行操作，但干擾病例結(jié)果不納入統(tǒng)計分析。

（八）質(zhì)量控制

臨床試驗開始前，建議進行相關(guān)培訓(xùn)，以確保研究者熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。

臨床試驗中應(yīng)制定嚴格的樣本轉(zhuǎn)運方案，確保樣本轉(zhuǎn)運過程不對臨床試驗產(chǎn)生影響，樣本轉(zhuǎn)運過程中應(yīng)做好樣本交接記錄，各臨床試驗機構(gòu)的樣本應(yīng)能夠溯源。

臨床試驗應(yīng)嚴格按照產(chǎn)品說明書進行操作，應(yīng)根據(jù)相關(guān)要求進行必要的HE染色，應(yīng)設(shè)置合理對照。

四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

五、參考文獻

1.《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第76號），2021年9月28日。

2.Xiao-Hua Zhou，Nancy A.Obuchowski，Donna K.McClish. 診斷醫(yī)學(xué)中的統(tǒng)計學(xué)方法（第二版） [M].北京:高等教育出版社，2016。

3.李衛(wèi).醫(yī)療器械臨床試驗統(tǒng)計方法（第二版） [M].北京:科學(xué)出版社，2016。