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同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年修訂版）
（2020年第62號(hào)）

同種異體植入性醫(yī)療器械是以同種來源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品。

我國目前對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對(duì)人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測血液中的病毒核酸。但是，盡管對(duì)供體進(jìn)行了嚴(yán)格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒存在的風(fēng)險(xiǎn)，以及生產(chǎn)過程中帶入外源病毒的風(fēng)險(xiǎn)。因此，要求同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中采用有效的病毒滅活工藝，并對(duì)病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗(yàn)證。

本指導(dǎo)原則是對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則是對(duì)注冊(cè)申請(qǐng)人和審評(píng)人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

本指導(dǎo)原則為2011年發(fā)布的《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的修訂版。主要修訂內(nèi)容包括：修改指導(dǎo)原則中部分語言描述，如常用病毒滅活方法、染毒方法、病毒滅活效果判定、其他需考慮的問題、病毒滅活工藝的再驗(yàn)證等;完善指示病毒類型選擇及舉例的相關(guān)描述;增加病毒滅活/去除有效性驗(yàn)證的原則。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于需要對(duì)生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的同種異體植入性醫(yī)療器械。

二、基本要求

（一）常用的病毒滅活方法

同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應(yīng)綜合考慮病毒滅活效果的驗(yàn)證，病毒滅活工藝對(duì)產(chǎn)品性能的影響，病毒滅活工藝本身的公認(rèn)性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟(jì)性。常用的病毒滅活方法舉例如下。

1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）

巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，利用病毒不耐熱的特點(diǎn)，通過適當(dāng)溫度和保溫時(shí)間處理，滅活病毒。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫(yī)療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運(yùn)用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時(shí)間。

2.γ射線輻照滅活法

γ射線輻照滅活法是主要通過破壞核酸而滅活病毒，其優(yōu)點(diǎn)包括滅活效率高、穿透力強(qiáng)、劑量易控制、無有害物質(zhì)殘留、無明顯溫度升高等。由于病毒在不同介質(zhì)中對(duì)射線的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活時(shí)，應(yīng)去除產(chǎn)品中的宿主組織和細(xì)胞，例如同種異體骨應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。采用該方法時(shí)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量，考慮輻照劑量的分布和滅活時(shí)間。

3.過氧乙酸-乙醇滅活法

過氧乙酸-乙醇滅活法可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒、艾滋病病毒、偽狂犬病病毒、牛病毒性腹瀉病毒、豬細(xì)小病毒等多種病毒。其用于同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活的效果已為實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。過氧乙酸具有極強(qiáng)的病毒滅活能力，乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制產(chǎn)品過氧乙酸殘留量及乙醇?xì)埩袅浚紤]滅活實(shí)際濃度和滅活時(shí)間。

4.乙醇滅活法

乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對(duì)多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、艾滋病病毒等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時(shí)，應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制乙醇?xì)埩袅?，考慮乙醇濃度和滅活時(shí)間。

（二）病毒滅活工藝的驗(yàn)證

1.指示病毒的選擇

應(yīng)選擇醫(yī)療器械可能污染的病毒，或與該病毒理化性質(zhì)相似的病毒。病毒選擇應(yīng)具有代表性，需考慮病毒顆粒的大小、核酸類型以及有無包膜等方面，應(yīng)考慮選擇對(duì)物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，至少應(yīng)選擇四類指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒，可參照下表選擇適宜的指示病毒。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝過程，考慮HIV對(duì)病毒滅活工藝的滅活抗性，確保相應(yīng)剩余風(fēng)險(xiǎn)可接受。

表1 可經(jīng)同種異體植入性醫(yī)療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及可選用的指示病毒（舉例）

2.染毒方法

由于同種異體植入性醫(yī)療器械多為固體形態(tài)，應(yīng)盡量模擬植入材料的病毒負(fù)載方式，考慮材料的結(jié)構(gòu)、尺寸和致密性，以及病毒在材料中的分布情況，結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)選擇合適的染毒方法，可采用浸泡法染毒（若適用）。病毒滅活零時(shí)的滴度應(yīng)至少≥10⁶TCID₅₀/mL，可根據(jù)產(chǎn)品和病毒的特點(diǎn)，選擇合適的浸泡溫度、時(shí)間及其他條件。

3.方案設(shè)計(jì)

3.1試驗(yàn)分組：應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對(duì)照組，對(duì)照組的設(shè)計(jì)應(yīng)能夠用于判定病毒滅活效果，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議包括細(xì)胞空白對(duì)照組、病毒對(duì)照組、樣品細(xì)胞毒性對(duì)照組（或滴定前進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)）、病毒滅活方法終止對(duì)照組及試驗(yàn)組。其中，病毒對(duì)照組的滴度是計(jì)算滅活量的基礎(chǔ)，應(yīng)證實(shí)其病毒的零時(shí)滴度≥10⁶TCID₅₀/mL。病毒滅活方法終止效果對(duì)照組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應(yīng)與病毒對(duì)照組相當(dāng)或接近，以證實(shí)病毒滅活方法能夠在設(shè)定的時(shí)間終止作用。試驗(yàn)組至少應(yīng)有適宜的時(shí)間點(diǎn)（包括零時(shí)），以闡明病毒滅活的動(dòng)力學(xué)，包括滅活動(dòng)力學(xué)曲線。

3.2觀察指標(biāo)：

3.2.1滅活病毒的滴度，采用細(xì)胞病變或其他適宜的指標(biāo)。

3.2.2病毒滅活速率、滅活曲線。以列表和做圖的形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。

3.3病毒滅活效果的判定

應(yīng)綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評(píng)價(jià)每次驗(yàn)證結(jié)果。

3.3.1所選擇的指示病毒是否適宜，驗(yàn)證的設(shè)計(jì)是否合理。

3.3.2病毒滴度降低量：病毒滅活零時(shí)的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過與病毒滅活后測定的殘留病毒量比較，計(jì)算出該方法實(shí)際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如因檢測方法的靈敏度造成檢測出的病毒降低量接近但小于4 logs時(shí)，應(yīng)盲傳三代，如無病毒檢出，亦可認(rèn)為是有效的去除/滅活病毒步驟。病毒去除/滅活有效性驗(yàn)證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，因此需獲得生產(chǎn)全過程中估計(jì)去除/滅活病毒的總降低量。一般每種指示病毒的總降低量為各步驟降低數(shù)量的總和。但是由于驗(yàn)證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低量≤1 log，則不宜將其計(jì)算在總量中。

3.3.3病毒滅活動(dòng)力學(xué)：病毒滅活通常不是簡單的一級(jí)反應(yīng)，評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時(shí)也要考慮病毒滅活動(dòng)力學(xué)。需以作圖的形式報(bào)告滅活動(dòng)力學(xué)驗(yàn)證結(jié)果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時(shí)才達(dá)到最低檢出限度值，則不能認(rèn)為是一個(gè)有效的病毒滅活方法，或者殘留的指示病毒對(duì)該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。

4.病毒滅活工藝驗(yàn)證原則

4.1若采用一步病毒滅活工藝，應(yīng)同時(shí)對(duì)有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒等四類病毒或其指示病毒（參見表1）的滅活效果均達(dá)到4logs以上，可認(rèn)為是有效病毒滅活工藝；若采用多步不同滅活原理的病毒滅活工藝，應(yīng)分別進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證，并保證上述每類病毒滅活工藝至少有一步的滅活效果可達(dá)到4logs以上。

4.2若采用的病毒滅活/去除工藝將導(dǎo)致醫(yī)療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據(jù)產(chǎn)品來源、采集及過程控制情況以及對(duì)患者的風(fēng)險(xiǎn)/受益分析來判斷其可接受性，但其單一去除/滅活病毒步驟的降低量仍需達(dá)到4 logs以上。

5.舉例說明病毒滅活效果的判斷

5.1初始病毒負(fù)載量為6 logs，檢測到剩余病毒量為4logs，則該病毒滅活工藝不是有效工藝，只能說明具有一定的病毒滅活作用。

5.2初始病毒負(fù)載量為6 logs，但由于產(chǎn)品本身的細(xì)胞毒作用使得檢測靈敏度限值為4 logs，僅能證明滅活2 logs的病毒。此種情況需改變?cè)囼?yàn)設(shè)計(jì)重新進(jìn)行驗(yàn)證，或者應(yīng)盲傳三代，如仍無病毒檢出，可認(rèn)為是有效的病毒滅活方法。

5.3初始病毒負(fù)載量為6 logs，但仍可檢測到2 logs的剩余病毒，且清除病毒的量可重復(fù)，應(yīng)認(rèn)為是有效的滅活病毒的方法。

5.4初始病毒負(fù)載量為6 logs，之后未檢測出病毒。但是由于檢測靈敏度限值為2 logs，僅能認(rèn)為大約滅活了4 logs病毒。事實(shí)上可能等于或大于4 logs，因此應(yīng)判定此方法為有效的滅活病毒的方法。

6.其他需考慮的問題

6.1如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測定，應(yīng)考慮這些處理方法對(duì)病毒檢測結(jié)果的影響。

6.2模擬的生產(chǎn)工藝參數(shù)應(yīng)盡可能與實(shí)際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間等。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對(duì)病毒滅活效果的影響。

6.3病毒滅活工藝對(duì)某些類型病毒滅活效果的局限性。

（三）病毒滅活工藝的再驗(yàn)證

產(chǎn)品結(jié)構(gòu)組成改變，生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)場地等變更時(shí)，應(yīng)考慮可能對(duì)特定病毒滅活工藝效果的影響，均需評(píng)價(jià)是否需對(duì)病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗(yàn)證。

三、名詞解釋

1.同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細(xì)胞異體真皮等。

2.植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：

- 全部導(dǎo)入人體；

- 替代上皮表面或眼表面；

通過外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過外科侵入方法，部分導(dǎo)入人體保留至少30天的器械，也認(rèn)作是植入性器械。

3.病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行病毒滅活。

四、參考文獻(xiàn)

1.《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（國藥監(jiān)注〔2002〕160號(hào)）

2.《消毒技術(shù)規(guī)范》衛(wèi)生部2002版

3.YY/T 0340-2002 《外科植入物 基本原則》

五、編寫單位

本指導(dǎo)原則由國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心編寫并負(fù)責(zé)解釋。