受理號：CSZ2200197

體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術(shù)審評報告

產(chǎn)品中文名稱：抗人球蛋白檢測試劑盒（水性膠法）

產(chǎn)品管理類別：第三類

申請人名稱：長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司

國家藥品監(jiān)督管理局
醫(yī)療器械技術(shù)審評中心

基本信息

一、申請人名稱長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司

二、申請人住所長春市高新北區(qū)新浦路 285 號

三、生產(chǎn)地址長春市高新北區(qū)新浦路 285 號

技術(shù)審評概述

一、產(chǎn)品概述

（一）產(chǎn)品主要組成成分

反應(yīng)板、水性膠、低離子強(qiáng)度鹽溶液、封板膜、判讀對照卡，主要成分見表 1。

表 1 試劑盒主要組成成分

（二）產(chǎn)品預(yù)期用途

用于直接抗人球蛋白試驗（自身免疫性溶血性疾病、新生兒溶血）和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、IgG 型不規(guī)則抗體致敏紅細(xì)胞的檢測。本品僅用于臨床檢測，不用于血源篩查。不規(guī)則抗體是引起臨床輸血反應(yīng)的主要原因之一。臨床為確保安全輸血、診斷治療新生兒溶血病等，對既往史有輸血、妊娠、血液病及輸過血液制品的人群和孕婦等都要求常規(guī)檢測不規(guī)則抗體；所有人群在輸血前均應(yīng)用 Coombs 試驗進(jìn)行交叉配血檢測。Coombs試驗是經(jīng)典的檢測不規(guī)則抗體（主要是IgG類）的方法，抗人球蛋白檢測試劑盒（水性膠法）是基于 Coombs 試驗結(jié)合免疫吸附原理研制的產(chǎn)品。

（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格

96T/盒（貨號：BX9001）、64T/盒（貨號：BX9002）

（四）產(chǎn)品檢驗原理

本產(chǎn)品是水性膠免疫分析技術(shù)結(jié)合免疫吸附原理的抗人球蛋白試驗，檢測被測紅細(xì)胞在體內(nèi)是否被 IgG 型不規(guī)則抗體致敏或被測血漿/血清中是否含有 IgG 型不規(guī)則抗體。

水性膠是一種分離介質(zhì)，可以將被測物中的細(xì)胞成分和非細(xì)胞成分進(jìn)行分離從而去除非特異性干擾，因此檢測過程中無需洗滌即可實現(xiàn)準(zhǔn)確檢測目的。試劑盒 U 型微孔板包被羊抗人多克隆抗人球蛋白抗體（AHG），水性膠加入 U 型管后通過離心進(jìn)入 U 型微孔板中。間接抗人球蛋白試驗中紅細(xì)胞與被測血漿/血清在 U 型管中 37℃孵育 15min，紅細(xì)胞表面抗原與被測血漿/血清中 IgG 型不規(guī)則抗體結(jié)合，形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物；直接抗人球蛋白試驗中被測紅細(xì)胞已在體內(nèi)被 IgG 型不規(guī)則抗體致敏，形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物。

在一定離心力的作用下，紅細(xì)胞及其免疫復(fù)合物穿過水性膠到達(dá) U 型微孔板底部，血漿/血清中非細(xì)胞成分不能通過水性膠。紅細(xì)胞免疫復(fù)合物被 U 型微孔板上包被的 AHG 捕獲，平鋪在 U 型微孔板底部表面，形成陽性反應(yīng)；若被測血漿/血清中不含 IgG 型不規(guī)則抗體或被測紅細(xì)胞未在體內(nèi)被 IgG 型不規(guī)則抗體致敏，則紅細(xì)胞不能形成免疫復(fù)合物，不能被 U 型微孔板上的 AHG 捕獲，在一定離心力的作用下紅細(xì)胞聚集于 U 型微孔板底部中央，形成陰性反應(yīng)。

二、臨床前研究概述

（一）主要原材料

主要原材料：包括羊抗人免疫球蛋白及水性膠，羊抗人免疫球蛋白為羊源多克隆抗體。主要原材料均為外購。申請人制定了主要原材料質(zhì)量要求并經(jīng)檢驗合格。

（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究

申請人通過探索反應(yīng)板抗體包被濃度，包被時間/溫度條件，封閉液的種類，抗體保護(hù)劑的用量，反應(yīng)板干燥條件，水性膠的濃度、pH 及防腐劑的種類，確定了最佳的生產(chǎn)工藝，包括：抗人球蛋白抗體的包被量、包被條件、封閉液配方、保護(hù)劑配方以及干燥條件、水性膠的配方等。通過對樣本用量，試劑用量，孵育條件和離心條件的探索確定了最佳的反應(yīng)體系。

（三）分析性能評估

本產(chǎn)品分析性能包括血清和血漿樣本適用性、準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、干擾試驗。申請人提交了三批產(chǎn)品（SY20200601、SY20200602、SY20200603）在適用機(jī)型上的性能評估資料。

針對適用的樣本類型，申請人采用 15 份同源血清、血漿樣本進(jìn)行比較研究，試驗結(jié)果顯示添加 IgG 型抗體后檢測結(jié)果均為陽性，且凝集強(qiáng)度均一致；未添加 IgG 型抗體的陰性血漿及血清樣本檢測結(jié)果均為陰性。血清和血漿檢測結(jié)果完全一致；此外通過添加 EDTA、肝素、枸櫞酸鈉三種抗凝劑的方式考察不同抗凝劑對樣本檢測的影響，結(jié)果顯示 EDTA 抗凝血漿符合檢測要求。

進(jìn)一步驗證 EDTA 終濃度為 0mg/mL、1.5mg/mL、2.2mg/mL 收集樣本對檢測結(jié)果無影響。針對準(zhǔn)確度研究，申請人使用 7 種 IgG 型血型抗體與相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞及抗原陰性紅細(xì)胞反應(yīng)/制備致敏細(xì)胞，驗證試劑盒間接/直接抗人球蛋白試驗準(zhǔn)確度；使用已知結(jié)果的間接抗人球陰性/陽性臨床樣本各 50 例比較檢測結(jié)果與實際結(jié)果是否一致，直接抗人球試驗陰性/陽性臨床樣本各 50 例比較檢測結(jié)果與實際結(jié)果是否一致。結(jié)果顯示本試劑盒間接抗人球蛋白試驗和直接抗人球蛋白試驗準(zhǔn)確度符合率 100%，檢測結(jié)果與實際結(jié)果一致，且 2 種適用機(jī)型檢測結(jié)果一致。針對精密度研究，申請人分別采用能產(chǎn)生 2+、1+凝集強(qiáng)度的 IgG 型抗 D 抗體、抗 Jka 抗體、抗 Fya 抗體及相應(yīng)抗原陽性細(xì)胞反應(yīng)、陰性血清與紅細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)行重復(fù)性驗證。批內(nèi)重復(fù)性采用同一批次試劑重復(fù)進(jìn)行檢測，重復(fù)次數(shù)不少于 10次。日間重復(fù)性采用同一批次試劑每日重復(fù)進(jìn)行檢測，重復(fù)天數(shù)不少于 10 天。批間重復(fù)性采用至少 3 批試劑進(jìn)行重復(fù)檢測。結(jié)果顯示本試劑盒間接抗人球蛋白試驗批內(nèi)、批間及日間重復(fù)性檢測結(jié)果符合率均為 100%。針對靈敏度評價，申請人使用臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7 種不規(guī)則抗體（IgG）進(jìn)行梯度稀釋進(jìn)行檢測簡介抗人球蛋白試驗結(jié)果，抗體梯度稀釋制備致敏細(xì)胞檢測直接抗人球蛋白試驗結(jié)果，同步比較不規(guī)則抗體水性膠法與試管法效價，試管法采用抗人球蛋白試劑國家標(biāo)準(zhǔn)品或用國家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的企業(yè)內(nèi)部參考品，其中 D 抗體從 512 倍開始 2 倍倍比梯度稀釋至 16384倍，其余抗體從原倍開始 2 倍倍比稀釋至 128 倍進(jìn)行檢測間接/直接抗人球試驗。結(jié)果顯示本試劑盒與已知抗體效價的血型抗體最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度＞1+，且抗體效價高于試管法間接/直接抗人球蛋白法測定結(jié)果。

針對干擾試驗，申請人在強(qiáng)、中、弱性質(zhì)的血型抗體及陰性樣本中添加不同濃度血紅蛋白、甘油三酯及膽紅素，使用 3 批試劑進(jìn)行檢測，評估樣本中能夠產(chǎn)生影響的臨界濃度。在強(qiáng)、中、弱性質(zhì)的抗體致敏紅細(xì)胞及未致敏紅細(xì)胞中添加不同濃度血紅蛋白、甘油三酯及膽紅素進(jìn)行評價。結(jié)果顯示：血漿/血清中甘油三酯濃度≤5mg/mL，膽紅素≤1.5mg/mL，血紅蛋白≤50mg/mL時不會對試劑盒間接抗人球蛋白試驗、直接抗人球蛋白試驗檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。

（四）陽性判斷值或參考區(qū)間研究

本產(chǎn)品是水性膠免疫分析技術(shù)結(jié)合免疫吸附原理的抗人球蛋白試驗，通過倍比稀釋 IgG 型抗 D、Fya 抗體及 Jka 抗體，使用試管法并同步使用三批試劑進(jìn)行間接抗人球蛋白試驗檢測，使之形成 4+～1+依次減弱的陽性結(jié)果。綜上確定本產(chǎn)品不同強(qiáng)度判定結(jié)果，對本產(chǎn)品陽性判斷值的適用性進(jìn)行了驗證。

（五）穩(wěn)定性研究

申請人對本產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性、37℃加速穩(wěn)定性、運輸條件放置穩(wěn)定性、試劑開封穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性等進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，確定了在各種條件下試劑的有效保存時間。

樣本穩(wěn)定性研究：為考察該產(chǎn)品對不同條件下不同儲存時間的樣本檢出性能，申請人使用該產(chǎn)品分別對短期儲存、長期儲存的樣本進(jìn)行測試，研究結(jié)果支持說明書聲稱。

三、臨床評價概述

申請人在吉林大學(xué)第一醫(yī)院、吉林省人民醫(yī)院、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院和吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院共 4 家臨床機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗。入組病例包括需要進(jìn)行抗人球蛋白檢測的病例，其中包括腫瘤、血液病、自身免疫病等病例。采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗，確認(rèn)本產(chǎn)品的臨床性能。對比試劑為長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司的抗人球蛋白檢測卡。

針對不規(guī)則抗體篩查試驗，臨床試驗共入組受試者4023例，其中不規(guī)則抗體陽性病例 128 例，不規(guī)則抗體陰性病例 3895 例；試驗結(jié)果顯示，本產(chǎn)品與對比試劑比較的陽性符合率為 100.00%（95%CI：97.09%，100.00%），陰性符合率為 100.00%（95%CI：99.90%，100.00%），總符合率為 100.00%（95%CI：99.90%，100.00%）。另外，還開展了試驗試劑手工法和試驗試劑全自動儀器檢測結(jié)果的一致性比較研究，共入組受試者 1006 例，其中不規(guī)則抗體陽性病例 17 例，不規(guī)則抗體陰性病例 989 例；試驗結(jié)果顯示，試驗試劑手工法和試驗試劑全自動儀器檢測結(jié)果的符合率為 100%。

針對交叉配血試驗，臨床試驗共入組受試者 3885 例，交叉配血主側(cè)試驗，相合病例 3825 例，不相合病例 60 例，交叉配血次側(cè)試驗，相合病例 3755 例，不相合病例 130 例；試驗結(jié)果顯示，本產(chǎn)品與對比試劑比較的陽性符合率為 100.00%（95%CI：97.72%，100.00%），陰性符合率為 100.00%（95%CI：99.90%，100.00%），總符合率為 100.00%（95%CI：99.90%，100.00%）。

另外，還開展試驗試劑手工法和試驗試劑全自動儀器檢測結(jié)果的一致性比較研究，共入組受試者1022例，交叉配血主側(cè)試驗，相合病例 1018 例，不相合病例 4 例，交叉配血次側(cè)試驗，相合病例 989 例，不相合病例 33 例；試驗結(jié)果顯示，試驗試劑手工法和試驗試劑全自動儀器檢測結(jié)果的符合率為 100%。針對 IgG 型不規(guī)則抗體致敏紅細(xì)胞檢測試驗，臨床試驗共入組受試者 4068 例，其中自身免疫性溶血性疾病 190 例，新生兒溶血病 103 例；陽性樣本 251 例，陰性樣本 3817 例；試驗結(jié)果顯示，本產(chǎn)品與對比試劑比較的陽性符合率為 100.00%（95%CI：98.49%，100.00%），陰性符合率為 100.00%（95%CI：99.90%，100.00%），總符合率為 100.00%（95%CI：99.91%，100.00%）。

另外，還開展試驗試劑手工法和試驗試劑全自動儀器檢測結(jié)果的一致性比較研究，臨床試驗共入組受試者1051例，其中陽性樣本 104 例，陰性樣本 947 例；試驗結(jié)果顯示，試驗試劑手工法和試驗試劑全自動儀器檢測結(jié)果的符合率為 100%。綜上所述，臨床試驗結(jié)果顯示該產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品的一致性較好。

四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定

根據(jù) YY/T 0316-2016 醫(yī)療器械風(fēng)險管理標(biāo)準(zhǔn)，對本產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險和受益分析。經(jīng)綜合評價，本產(chǎn)品的受益大于風(fēng)險。

（一）受益評估

不規(guī)則抗體是引起臨床輸血反應(yīng)的主要原因之一。臨床為確保安全輸血，對既往史有輸血、妊娠、血液病及輸過血液制品的所有受血者和供血者及孕婦等都要求常規(guī)檢測不完全抗體以及受血者和供血者交叉配血是否相容。已有大量的臨床研究證明抗人球蛋白試驗?zāi)軌驒z出受血者及供血者中不規(guī)則抗體，能夠提高輸血安全，提高了患者的臨床受益。該產(chǎn)品為一種用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血以及致敏細(xì)胞檢測的水性膠法抗人球蛋白試劑，為臨床常規(guī)進(jìn)行間接抗人球蛋白試驗以及直接抗人球蛋白試驗提供了檢測方法。

綜合回顧性臨床研究和分析性能等前期實驗室研究，產(chǎn)品分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性可控，臨床試驗結(jié)果顯示該產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品的一致性較好。產(chǎn)品同時能夠免除樣本中纖維蛋白等其他大分子非特異性成分的干擾，能夠保證輸血安全。本產(chǎn)品為體外診斷試劑，不接觸患者，不會對患者造成外的損害。

（二）風(fēng)險評估

1.假陽性和假陰性分析結(jié)果導(dǎo)致的風(fēng)險

目前未在前期研究或臨床試驗過程中發(fā)現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果，若出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果，影響患者進(jìn)行輸血配血或可能導(dǎo)致輸注不合血液出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。對檢測結(jié)果存疑樣本，增加說明書提示，臨床應(yīng)結(jié)合實際情況使用其他方法學(xué)產(chǎn)品或參照金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行重復(fù)檢測，進(jìn)一步降低風(fēng)險。

2.操作不規(guī)范導(dǎo)致的風(fēng)險檢測人員操作不規(guī)范會增加結(jié)果出現(xiàn)錯誤的風(fēng)險。

對檢測醫(yī)生進(jìn)行規(guī)范化培訓(xùn)，可控制風(fēng)險。

（三）受益-風(fēng)險的確定

患有腫瘤疾病、血液病、自身免疫性疾病、手術(shù)患者或其他涉及輸注全血、濃縮紅細(xì)胞、紅細(xì)胞懸液、洗滌紅細(xì)胞、冰凍紅細(xì)胞、濃縮白細(xì)胞、手工分離濃縮血小板等患者，需要常規(guī)進(jìn)行交叉配血及不規(guī)則抗體篩查，患有或疑似自身免疫性溶血、新生兒溶血以及藥物性溶血患者均需進(jìn)行致敏紅細(xì)胞檢測，本產(chǎn)品能夠為患者提供符合要求的檢測結(jié)果，能夠檢出臨床弱抗體及去除樣本中干擾成分對檢測結(jié)果的干擾，患者可獲得受益。

通過風(fēng)險/受益綜合評價，目前已知及可預(yù)見風(fēng)險是可控的，認(rèn)為該產(chǎn)品上市帶來的預(yù)期受益大于風(fēng)險。

綜合評價意見

依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務(wù)院令第 739 號）、《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第 48 號）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對申請人提交的注冊申報資料進(jìn)行系統(tǒng)評價，申報產(chǎn)品符合安全性、有效性的要求，符合現(xiàn)有認(rèn)知水平，建議準(zhǔn)予注冊。

2025 年 1 月 2 日

來源：CMDE